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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] 做SRAP标记的进来,DNA聚丙烯酰胺电泳,预电泳问题。。。

DNA,SRAP标记,6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题:
1  预电泳电压,时间?
2  预电泳好处?
3 为什么同一块胶,两侧的泳道跑的慢,中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置,普通型号的。DYCZ-21型号。



谢谢哈哈
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阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
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changes

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
墨池(金币+2): 2011-07-23 13:00:41
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-07-23 17:32:18
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 14:46:11:
DNA,SRAP标记,6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题:
1  预电泳电压,时间?
2  预电泳好处?
3 为什么同一块胶,两侧的泳道跑的慢,中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置,普通型号的。DYCZ-21型号。
...

建议老板买专门的测序电泳系统,国产的我们用DYCZ-20C 和DYCZ-20C 两种DNA序列分析电泳仪,你提到的DYCZ-21属于多功能的电泳系统,做SREP多态性分析效果会差些。当然了你如果充分掌握了仪器的使用或实验室有前人做过具有成熟的体系也是可以的。
1.预电泳的电压和时间根据不同的仪器有差别,值得一提的是预电泳的功率或电压要比正式电泳是要高一些。
2.预电泳的作用:1.加热胶(使用的是TBE缓冲液) 2.通过预电泳“冲洗”胶空、分子筛,使聚丙烯胶干净,从而使分离效果更好。
3. 可能原因:1.灌胶前没有将TEMED、过硫酸铵与胶充分混匀,2.两块玻璃板受力不匀,3.玻璃板已经变形,不平了。
祝好运。
12楼2011-07-23 11:27:17
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查看全部 23 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-22 19:16:38
楼主最近提问很多啊,呵呵~

没有冷却装置很正常,一般都拿冰块去降温:拿个大盘子,先铺一层冰,然后放上电泳槽,最后再用尽可能多的冰块把电泳槽埋起来,当然,别盖过顶,不然冰融了水会流进去。隔段时间检查下,冰融了再换新的。
2楼2011-07-22 16:59:20
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

其他问题不懂啊,不要问我--!
3楼2011-07-22 17:00:59
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

墨池(金币+2): 2011-07-22 20:27:02
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 14:46:11:
DNA,SRAP标记,6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题:
1  预电泳电压,时间?
2  预电泳好处?
3 为什么同一块胶,两侧的泳道跑的慢,中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置,普通型号的。DYCZ-21型号。
...

前两个问题:对于预电泳,有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂,其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右,电压根据胶的长度来,印象里好像是5~10V/cm,反正100V以下都差不多了,影响不大。
第三个问题:条带弯曲的话,一种原因就是由于没有冷却装置,中间部分温度较高,所以跑的比较快一点。还一种原因是电泳槽的密封性能有问题,某处可能“漏电”了。
4楼2011-07-22 17:48:00
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