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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物测序问题
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happywoheni

铁虫 (小有名气)

[求助] pcr产物测序问题

前两天把pcr产物送去测序了，只有上下游引物没有测出来，比目的基因少了几十bp,这样得到的序列有用吗？是不是要进行下一步连接转化后再测序更好？
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1楼 2011-07-22 12:08:43
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
引用回帖:
Originally posted by happywoheni at 2011-07-22 20:43:34:
如果只做克隆，难道这样的少了上下游引物的序列也可以？不行吧，还不是一样得知道全长。

做了克隆，载体的序列是知道的，用多克隆位点两端的序列设计的引物不就可以测到目的片段的全长了...
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11楼2011-07-23 11:31:53
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
happywoheni(金币+1): 2011-07-22 12:35:53
西瓜(金币+2): good 2011-07-22 16:51:53
测PCR产物不是上下游引物没测出来而是测不出来，如果你对当前的测序原理懂的话就知道为什么测不出来了，如果想得到全序列的信息必须要连到载体上，让后从载体上找引物来测，所以连转这一步是绝对有必要的
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2楼2011-07-22 12:28:06
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-07-22 16:52:07
（1）请公司重测，无需缴费。
（2）请查看是否只是下游引物未测出来，上游有可能是非特异结合（即序列与你的引物序列仅有1个甚至几个碱基的差别）
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3楼2011-07-22 12:30:03
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

你的引物设计在什么位置？
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4楼2011-07-22 12:32:04
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