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wsz2056

金虫 (小有名气)

[交流] 蛋白纯化

我的目的蛋白很容易被洗脱下来，我觉得可能组氨酸标签与柱子结合不牢固，我想加点变性剂，如盐酸胍或者脲素，请问大家，加多少变性剂，才能保证又能使结构解开，还能保证不用蛋白复性。
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1楼 2011-07-22 08:51:46
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
wsz2056(金币+2):谢谢参与
西瓜(金币+5): 真正的专家！ 2011-07-22 12:04:15
引用回帖:
Originally posted by wsz2056 at 2011-07-22 08:51:46:
我的目的蛋白很容易被洗脱下来，我觉得可能组氨酸标签与柱子结合不牢固，我想加点变性剂，如盐酸胍或者脲素，请问大家，加多少变性剂，才能保证又能使结构解开，还能保证不用蛋白复性。

你这个难度太大了，既要变性又要不变性，矛盾。而且这个也没经验可用的，每个人的蛋白性质不一样，别人用0.1M可能很好，你用未必就行，个人觉得还是自己摸索是王道。
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2楼2011-07-22 10:17:57
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-22 12:04:22
根据蛋白质的性质来定。。。同意楼上的实验来确定。。
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3楼2011-07-22 10:59:58
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wsz2056

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-22 10:17:57:
你这个难度太大了，既要变性又要不变性，矛盾。而且这个也没经验可用的，每个人的蛋白性质不一样，别人用0.1M可能很好，你用未必就行，个人觉得还是自己摸索是王道。

谢谢   那就自己摸索 我就是怕加多了引起变性  所以向大家询问一下 有没有做过，心里有个准备
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4楼2011-07-22 13:36:06
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wsz2056

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zlu520 at 2011-07-22 10:59:58:
根据蛋白质的性质来定。。。同意楼上的实验来确定。。

那你遇到过目的蛋白和镍柱结合不好的情况吗？
有什么方法？
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5楼2011-07-22 13:39:53
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-22 17:02:56
引用回帖:
Originally posted by wsz2056 at 2011-07-22 13:39:53:
那你遇到过目的蛋白和镍柱结合不好的情况吗？
有什么方法？

有的，重新构建，换在蛋白另外一端加了一个His-tag。
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6楼2011-07-22 13:43:11
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wsz2056

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-22 13:43:11:
有的，重新构建，换在蛋白另外一端加了一个His-tag。

我这个载体只有c端有his  而且又不想换载体，因为我这个比较复杂
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7楼2011-07-22 14:13:53
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by wsz2056 at 2011-07-22 13:39:53:
那你遇到过目的蛋白和镍柱结合不好的情况吗？
有什么方法？

可以查相关文献。。确定下变性的最佳条件。。。
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8楼2011-07-22 17:33:50
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