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wsz2056

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[交流] s蛋白纯化

镍柱纯化蛋白，杂蛋白会不会比目的蛋白与镍柱的结合更牢固？谢谢

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1楼 2011-07-21 15:31:32

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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

引用回帖:

Originally posted by amisking at 2011-07-21 20:29:52:
上图看看！

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6楼2011-07-21 20:32:53

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zsy1106

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★
wsz2056(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+4): 鼓励发帖交流。 2011-07-21 20:29:38

先简单介绍下NI柱纯化蛋白的原理吧。NI柱纯化依据的是组氨酸能与多种过渡金属离子Ni2+，Co2+等发生特殊的相互作用，因此可以把富含这类氨基酸的蛋白质吸附，从而达到分离的目的。镍离子有六个螯合价数，除掉和柱子配基螯合掉的价数，剩余的就是可以和蛋白中组氨酸螯合掉的价数。
通常我们在目的蛋白上会融合6个组氨酸，只要这六个组氨酸的位点在蛋白质表面而不是被包在构象内部，就可以在合适的条件下挂在柱子上，再通过一定浓度的咪唑洗脱。杂蛋白中一般不会有如此集中的组氨酸数目，所以即使有一两个组氨酸使得杂蛋白挂在柱子上，也容易在低浓度咪唑的时候就先被洗脱下来。当然，也没有人能保证不会有一些特殊的杂蛋白，其组氨酸数目更多更集中，就会比目的蛋白结合的还要牢固。但是通过梯度洗脱，应该也能一定程度上和目的蛋白分离。