24小时热门版块排行榜    

查看: 709  |  回复: 4
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

犹寒

铁虫 (初入文坛)

[交流] TA克隆 已有4人参与

请问:
     我用takara的试剂盒做克隆,目的片段是PCR割胶回收的片段,长度从300bp-700bp都有,但是连接出来的蓝白筛选很好,有很多白斑,但是,送去测序后,测出来好多的空质粒,不知道是什么原因,如果是没连上,那应该是蓝斑才对啊,为什么那么多白斑都是质粒呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 说得很好! 2011-07-21 11:27:29
你可以控制一下检查的时间,最好是16小时以内,时间长了,氨苄降解到不能抑制未转化菌生长,可能会挑到没有质粒的菌;至于假阳性,也可能是你的X-GAL涂的不好,不行你就直接加到培养基里吧;另外,你挑的阳性克隆可以先提一下质粒,看一下有没有质粒变长再送去测序
2楼2011-07-21 10:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healerly

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流!一般都是检验过有外源片段连进去再测序呢。 2011-07-21 11:28:05
本帖内容被屏蔽

3楼2011-07-21 10:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米饭

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
最近我也有这样的情况发生 蓝白斑很明显 挑的白斑若干
双酶切检验只有载体条带 外源片段在500bp 却无条带
我以为是我外源片段量不够染得不明显,就选了2个去测序
结果全不是我要的
现在重新连一次再试试
4楼2011-07-21 11:06:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
其实不蓝白斑筛选挑到阳性克隆的几率还是很大的。
进行菌液PCR鉴定要做阴性和阳性对照,一般来说,菌液PCR跑胶的带像阳性的带那样亮,才能考虑是阳性。然后提质粒做下双酶切,就更加确定了
你的日子如何,你的力量也必如何!
5楼2011-07-21 12:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 犹寒 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +4 西山十月 2026-08-09 6/300 2026-08-10 00:16 by liufeng0619
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +4 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-09 22:24 by otj2008
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见