应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆
51/1返回列表
查看: 636  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

犹寒

铁虫 (初入文坛)

[交流] TA克隆 已有4人参与

请问：
     我用takara的试剂盒做克隆，目的片段是PCR割胶回收的片段，长度从300bp-700bp都有，但是连接出来的蓝白筛选很好，有很多白斑，但是，送去测序后，测出来好多的空质粒，不知道是什么原因，如果是没连上，那应该是蓝斑才对啊，为什么那么多白斑都是质粒呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2011-07-21 09:33:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 说得很好！ 2011-07-21 11:27:29
你可以控制一下检查的时间，最好是16小时以内，时间长了，氨苄降解到不能抑制未转化菌生长，可能会挑到没有质粒的菌；至于假阳性，也可能是你的X-GAL涂的不好，不行你就直接加到培养基里吧；另外，你挑的阳性克隆可以先提一下质粒，看一下有没有质粒变长再送去测序
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-07-21 10:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流！一般都是检验过有外源片段连进去再测序呢。 2011-07-21 11:28:05
本帖内容被屏蔽
3楼2011-07-21 10:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米饭

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
最近我也有这样的情况发生 蓝白斑很明显 挑的白斑若干
双酶切检验只有载体条带 外源片段在500bp 却无条带
我以为是我外源片段量不够染得不明显，就选了2个去测序
结果全不是我要的
现在重新连一次再试试
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-21 11:06:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
其实不蓝白斑筛选挑到阳性克隆的几率还是很大的。
进行菌液PCR鉴定要做阴性和阳性对照，一般来说，菌液PCR跑胶的带像阳性的带那样亮，才能考虑是阳性。然后提质粒做下双酶切，就更加确定了
赞一下(1人) 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
5楼2011-07-21 12:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 犹寒 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 24/1200 2026-04-16 21:24 by Art1977
[考研] 085410-273求调剂 +7 X1999 2026-04-10 7/350 2026-04-16 16:32 by noqvsozv
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 273求调剂 +6 白居不易. 2026-04-09 8/400 2026-04-15 22:02 by wooluyong
[考研] 复试调剂 +21 积极向上； 2026-04-10 23/1150 2026-04-15 12:50 by 西北望—风沙
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 54/2700 2026-04-14 18:00 by lhj2009
[考研] 279求调剂 +12 张番茄不炒蛋 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:38 by zs92450
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +10 刘墨墨 2026-04-13 10/500 2026-04-14 15:16 by zs92450
[考研] 考研求调剂 +6 ban班小七 2026-04-11 6/300 2026-04-14 14:06 by 哆啦A梦只是个梦
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +33 yang婷 2026-04-10 34/1700 2026-04-12 08:11 by Art1977
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 一志愿京区985，085401电子信息，本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭