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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于基因工程药物在CHO细胞中的表达问题
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wahaha9115

木虫 (小有名气)

[交流] 关于基因工程药物在CHO细胞中的表达问题

战友们，大家好！小弟想做基因工程药物在CHO细胞中的大规模表达培养。有以下几个问题：
1.关于外源基因转入CHO细胞：我想问问载体的选择对于后面的表达量影响大么，不同的载体会造成表达量的巨大差异么？？（如果哪位战友做过这方面的工作并获得较大产量，那么你们用什么载体呢？）还有就是转染策略：是选择贴壁细胞转染、筛选成功之后再驯化成悬浮培养还是直接用CHO的悬浮细胞转染呢？另外，采用哪种方法转染效率高并且利用筛选到转入目标质粒的阳性细胞株呢？
2.有什么方法可以克服悬浮之后的细胞成团问题，也就是说能够实现细胞的高密度、不结团的大量表达么？？
3.有木有自制的无血清培养基？自制培养基需要考虑哪些加入物质？
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1楼 2011-07-20 17:09:14
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anwenzhu

铜虫 (初入文坛)
★
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转染之后进行悬浮驯化，加入MTX进行筛选，在摇床上摇动可以避免结团，注意是否需要二氧化碳，买粉状培养基自己配置，可以加一些糖类，还有cell boost2或者4、5、6等
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2楼2011-10-28 09:44:43
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wahaha9115(金币+1): 2012-02-21 17:27:21
稳定表达对基因载体的要求不高，关键是看你基因插入的位点。市场上有定点整合的质粒载体，可以使你的基因整合到转录频率高的地方。
一般是先转染，然后筛选，驯化为无血清悬浮培养。
如果细胞悬浮培养时持久地结团，可在生长液中加入50μg/ml 的胰
蛋白酶；3,5个细胞成团没事！
实现高产量表达，细胞株和细胞密度是两个关键因素。多筛几株备用，细胞密度主要的影响还是培养基等。           
自制培养基可以，不过没有几年的功夫拿不下来。

把上面的问题都搞透了，没有三两年的功夫不好弄。加油！
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3楼2011-10-28 14:51:44
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