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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 测序的问题已有5人参与

想请教一下大家一般测序公司的准确率是多少啊?需要测重复吗?
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-10 20:44:55:
我觉得,就是多挑几个克隆菌,先摇菌,再提质粒,再酶切,再连表达载体,再送去测序(留下原菌液),测序准确的,再用原菌液做表达——这是用T载体的情况;
如果你直接用的表达载体做的克隆的话,直接再挑几个送 ...

谢谢您的建议,我刚又把测序结果分析了一下,一共测得6条序列,貌似是两两一组,我觉得应该不是酶的问题,基因为多拷贝的可能性多一点,我决定把不一样的三条序列都做表达了,看看情况再说!还有想问一下您说的留原菌液是用甘油-80℃保存吧,用的时候划线挑单克隆再用吧!
23楼2011-07-10 21:19:00
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(金币+1): 叠峰 最闹心 2011-07-06 14:14:06
测出来是你要的话不用的,测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。
2楼2011-07-06 13:59:15
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 13:59:15:
测出来是你要的话不用的,测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。

我克一个基因,挑了三个单克隆测序,可是结果都不一样,但是差得不多,所以在想会不会是测序的问题,但是看峰图都挺好的呀!难道我的基因是多拷贝?
3楼2011-07-06 14:42:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): good 2011-07-06 17:02:26
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-07-06 14:42:15:
我克一个基因,挑了三个单克隆测序,可是结果都不一样,但是差得不多,所以在想会不会是测序的问题,但是看峰图都挺好的呀!难道我的基因是多拷贝?

应该不是测序的问题,现在测序结果还是比较可信的。三个单克隆三个不同结果也可以理解,基因应该是单拷贝的,都连进去了,但连的是不同的基因,是前面实验的问题。三个里面如果有一个是你要的,就挑取那个单克隆,其他两个单克隆都不要了,继续后面实验,如果都不是你要的,就挑别的单克隆去测序了或者重新转化了。
4楼2011-07-06 15:17:20
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