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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 蓝月望宁 at 2011-07-10 02:42:15:
问题已解决，大家说的没错，蛋白杂志太多。
另外再问大家。有时候DNA电泳时，MARker都跑的不好，是什么原因？补充：不是凝胶的问题。

电压和缓冲液是没有问题的，因为我们那个电泳槽是公用的，其他人跑的都不错。我估计是marker本身的问题。但是这个怎么解决？换一个？
另外大家提细菌基因组DNA时用多大的电压？时间呢？
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11楼2011-07-12 07:36:03
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amose

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励热心交流，请看第十楼。 2011-07-12 19:26:04
是不是Marker太小了你用的是多少bp的啊，我提放线菌基因组跑胶是100v，35分钟左右，时间是要看你指示剂跑得情况，一般指示剂到倒数第二个线进行了
对了你提的是放线菌么？怎么进行细胞破碎的？
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
12楼2011-07-12 17:49:54
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 非常热心，鼓励之 2011-07-13 08:04:48
引用回帖:
Originally posted by amose at 2011-07-12 10:49:54:
是不是Marker太小了你用的是多少bp的啊，我提放线菌基因组跑胶是100v，35分钟左右，时间是要看你指示剂跑得情况，一般指示剂到倒数第二个线进行了
对了你提的是放线菌么？怎么进行细胞破碎的？

Marker为Lambda Mix Marker ，19.最大的48502kb。不是过小。
我的是阳性菌，用溶菌酶破壁。
你用的凝胶浓度为多少？
对基因组来说，分子片段较大，理论上应该是低电压，长时间的，你怎么用这么高的电压，这么短的时间？请问你电泳效果如何？可不可以传图上来？
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13楼2011-07-13 07:40:25
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
不好意思是48502bp
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14楼2011-07-13 08:07:08
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amose

银虫 (正式写手)
我所用的电压和时间是实验室里师兄教的，我们得到的条带只是为了检验下是否提出，一般就是在胶空附近有一亮条带！
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15楼2011-07-14 11:04:25
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amose at 2011-07-14 04:04:25:
我所用的电压和时间是实验室里师兄教的，我们得到的条带只是为了检验下是否提出，一般就是在胶空附近有一亮条带！

在胶空有一条亮带是什么意思？你指的是点样孔？
只是为了检验是否提出？这就是你提DNA的目的吗？
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16楼2011-07-14 13:05:37
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amose

银虫 (正式写手)
嗯是在点样孔附近，为了后面的扩16s
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
17楼2011-07-14 20:19:02
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bogaoedu

银虫 (初入文坛)
很可能是杂质太多，建议抽提一下，看看效果！
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18楼2011-07-14 20:28:08
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liugangpk545

铜虫 (小有名气)
是不是电泳缓冲液的问题？   电泳槽里的缓冲液   最好一天一换
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有一种缘，放手后成为风景。
19楼2011-12-06 16:26:12
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liugangpk545

铜虫 (小有名气)
DNA片段的大小与所需的电压没有关系，要用多少的电压与电泳槽两个电极的距离有关，理论上电压不应该超过5 v／cm，电泳的电压就是正负电极的距离*5v。但是好像超过了也没关系，但是也不能太大，还是在5v/cm以下好点。跑电泳的过程同时也是样品扩散的过程，电压太小，扩散就会多点，条带也不清晰。' _9 J7 \4 Z2 G( b
区分不同大小的片段取决于胶的浓度。

以上引用“ hndxws  “希望对你有所帮助
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有一种缘，放手后成为风景。
20楼2011-12-06 16:45:20
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