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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【原创经验篇】由一个简单的酶切重组载体想到的..........
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
引用回帖:
Originally posted by 星之砂 at 2011-07-06 09:32:21:
LL的分析好具体啊，我现在也在做连接，待连接基因大概3Kb多，可是都连不上去，望指点迷津啊啊

基因3kb，载体有多大，先定量看看两者的分子量有多大，然后再算一下摩尔比，其实根据经验，大体看一下亮度就可以确定一个基本的加的量的比例了。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
21楼2011-07-06 09:39:15
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星之砂

银虫 (小有名气)
★
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谢谢LL，因为是新手，想知道那个摩尔比的算法怎么算，有具体的书或资料可以查吗？谢谢！
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每天的充实总好过发呆打诨一辈子
22楼2011-07-07 10:54:53
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piggpi

金虫 (小有名气)
★
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我正在起步阶段，向楼主学习
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在很久很久以前
23楼2011-07-31 21:06:44
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lingbi

银虫 (正式写手)
★
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45°活化一下在转化，出处在哪？没听别人说过，请问你做过对比试验么？
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24楼2011-08-30 18:37:34
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
引用回帖:
24楼: Originally posted by lingbi at 2011-08-30 18:37:34:
45°活化一下在转化，出处在哪？没听别人说过，请问你做过对比试验么？

其实这一步也可以省略的。。。
是为了是两者更好的粘性末端化。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
25楼2011-08-30 19:30:26
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zhongmianhua

木虫 (小有名气)
★
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请问一下楼主，连接之前呢，先将载体和基因混合，热活化一下，即45度10min，然后加连接酶，buffer，ddH2O；这个热活化 有什么特别的功效没有，我们实验室好像一般都没有这样一个步骤，也可以做的出来
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体会生活
26楼2011-09-07 19:55:43
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
送鲜花一朵
虽然现在不怎么做实验了，还是支持楼主！

[ Last edited by wanhscn on 2011-9-7 at 21:32 ]
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真相是最大的奢侈品
27楼2011-09-07 21:31:00
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256k

新虫 (正式写手)
★
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狂顶楼主哪，这几天一直连接酶切，质粒i就是不亮，一切下面就是没有条带，没条带呀有木有，原来可能是质粒的浓度不够，有木有呀 有木有！
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28楼2011-09-08 11:16:32
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 天使托 at 2011-07-02 20:45:36:
活化是为了就是处理粘性末端。。。。
其实不活化也可以正常连接的。。。
我有时懒得活化照样可以进行连接的。。。。

不愧为这方面的专家,学习之!
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真相是最大的奢侈品
29楼2011-09-08 11:26:42
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alice

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by erryzhen at 2011-07-02 16:29:26:
楼主说的“连接之前呢，先将载体和基因混合，热活化一下，即45度10min”适用于所有的载体和目的片段吗？我以前没试过~望指点迷津！

我最近也在做连接，好崩溃，热活化有效果吗？
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To be strong enough
30楼2011-12-03 15:59:21
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