应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有用过pPICZB质粒的虫友吗？
51/1返回列表
查看: 1733  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

worm2010

金虫 (小有名气)

[交流] 有用过pPICZB质粒的虫友吗？

正打算最近要转化毕赤酵母，用pPICZB质粒转化。看了毕赤表达手册但是有些问题没搞明白，请各位虫友赐教！

1 转化毕赤（例如GS115），pPICZB是包内表达型的质粒，请问选取表达试剂盒里的对照时应该选哪种质粒进行转化？

2 转化后表型的筛选目的我不是很清楚，为何要筛选表型呢？

3甲醇利用正表型和慢表型哪个用来表达比较好？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-06-27 13:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zheng20089829 at 2011-06-29 21:54:58:
GS115是甲醇利用快速型，KM71H是慢速型，一般要发酵前者用的比较多。每种蛋白也不一样，楼主用胞内的话纯化起来不太方便，可以用Za系列的试试，可以的话会方便很多，如果有糖基化可以用去糖基化酶处理下，不影响活 ...

那请问表达蛋白是不是筛选正表型的重组菌株来进行表达比较好呢？
我看手册上说因为重组质粒转入毕赤之后可能发生在不同的地方进行交换，交换的地方不同所产生的表型就不同。所以我就不是很明白它上面要求转化完之后有一个表行筛选的过程，目的是什么，是筛正表型进行表达还是筛选出慢表型进行表达。。。。
赞一下 回复此楼
9楼2011-06-30 08:59:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

biopanda

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
做毕赤酵母很少用胞内表达吧，楼主为什么选择这个？
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性，以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同，根据实验需要选取（不能与目的基因含有德尔酶切位点相同），别的没差别。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-28 13:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biopanda at 2011-06-28 13:06:19:
做毕赤酵母很少用胞内表达吧，楼主为什么选择这个？
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性，以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同，根据实验需要选取（不能与目的基因含有 ...

我选这个胞内表达是为了防止目的蛋白被糖基化。重组的目的基因是来自于细菌的
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-28 19:51:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biopanda at 2011-06-28 13:06:19:
做毕赤酵母很少用胞内表达吧，楼主为什么选择这个？
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性，以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同，根据实验需要选取（不能与目的基因含有 ...

我想问，筛选表型的目的，而不是筛选转化子的目的。
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-28 19:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭