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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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worm2010

金虫 (小有名气)


[交流] 有用过pPICZB质粒的虫友吗?

正打算最近要转化毕赤酵母,用pPICZB质粒转化。看了毕赤表达手册但是有些问题没搞明白,请各位虫友赐教!

1 转化毕赤(例如GS115),pPICZB是包内表达型的质粒,请问选取表达试剂盒里的对照时应该选哪种质粒进行转化?

2 转化后表型的筛选目的我不是很清楚,为何要筛选表型呢?

3甲醇利用正表型和慢表型哪个用来表达比较好?
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worm2010

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by biopanda at 2011-06-28 13:06:19:
做毕赤酵母很少用胞内表达吧,楼主为什么选择这个?
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性,以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同,根据实验需要选取(不能与目的基因含有 ...

我选这个胞内表达是为了防止目的蛋白被糖基化。重组的目的基因是来自于细菌的
4楼2011-06-28 19:51:16
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biopanda

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
做毕赤酵母很少用胞内表达吧,楼主为什么选择这个?
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性,以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同,根据实验需要选取(不能与目的基因含有德尔酶切位点相同),别的没差别。
3楼2011-06-28 13:06:19
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worm2010

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by biopanda at 2011-06-28 13:06:19:
做毕赤酵母很少用胞内表达吧,楼主为什么选择这个?
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性,以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同,根据实验需要选取(不能与目的基因含有 ...

我想问,筛选表型的目的,而不是筛选转化子的目的。
5楼2011-06-28 19:52:49
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biopanda

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by worm2010 at 2011-06-28 19:51:16:
我选这个胞内表达是为了防止目的蛋白被糖基化。重组的目的基因是来自于细菌的

那楼主为什么不直接用PET系列载体呢?
6楼2011-06-28 23:05:18
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