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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

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[交流] 聚乙二醇浓缩蛋白对蛋白的影响

一直在用20000的聚乙二醇浓缩我的蛋白，方法是这样的，我的蛋白通过硫酸铵沉淀后，袋里水很多，将聚乙二醇晶体洒在透析袋（排阻3500）上，直到析出水分达到要求为止。
今天逛论坛，看到有人说聚乙二醇虽然分子量大，但这种浓缩方法也可能使一部分进入到透析袋中，想问问，聚乙二醇与蛋白质接触，会对蛋白质产生影响吗？我这种浓缩直接撒晶体的方法，对我的蛋白会有变性等影响吗？我的蛋白主要是碱性蛋白。谢了

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1楼 2011-06-24 15:20:02

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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★ ★
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silicare(金币+3, EPI+1): 2011-06-25 09:06:23
nayitian_nan(金币+2): 恩啊，就是的，是看了淀粉酶你给那个朋友的帖子，我考虑过超滤，但实验室条件有限，我打算透析完直接冷冻干燥，以前是聚乙二醇浓缩后冻干的~ 2011-06-25 09:47:53

你说看到那样说的那个人就是我，很聪明，懂得先搜集资料。但是PEG2万确实是有可能透得过排阻3500的透析袋的，虽然标明3千五的透析袋质量再差，有超过2万的孔径也少，但透析袋的排阻标准是球状蛋白质，PEG是线性的，理论上比3千5小的孔径也能进去。

你用了硫酸铵沉淀，下一步如果接上疏水层析也可以浓缩样品，我样品有二百多毫升的层析之后活力组分合并大概有50毫升，算是浓缩了，也纯化了好几倍，不过会有30%损失。

你也可以超滤，用滤膜，可以买超滤管离心，也可以买超滤膜开氮气加压。

至于PEG2万对你的蛋白质有没有影响就很难说了，蛋白质各有不同，谁都说不定，要先自己试。

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3楼2011-06-24 23:17:49

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zsy1106

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
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nayitian_nan(金币+1): 谢谢，还好，我用的是水溶液，里外都是~ 2011-06-24 17:02:35
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-24 20:08:56
silicare(EPI+1): 2011-06-25 09:06:16

一般来说这样做不会有影响。楼主担心的话，可以试试别的方法啊。例如：
1、蛋白浓缩管——快且保险的方法；
2、用电风扇对着透析袋吹，或者实验室如果有抽干室或者干燥室，放进去，过一段时间去看看，水分就会少掉很多，虽然方法有点土，但是能用（我用过），但是这样做要注意的是，要求一定要低温保存的蛋白谨慎操作，毕竟电风扇不能放进冰箱，抽干室即使有空调温度也不会很低。
还有就是注意水分去掉后，除了蛋白浓缩了外，缓冲液的离子浓度之类的也会改变，有需要的话记得要调回去。

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2楼2011-06-24 15:40:04

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