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nayitian_nan

木虫 (小有名气)


[交流] 聚乙二醇浓缩蛋白对蛋白的影响

一直在用20000的聚乙二醇浓缩我的蛋白,方法是这样的,我的蛋白通过硫酸铵沉淀后,袋里水很多,将聚乙二醇晶体洒在透析袋(排阻3500)上,直到析出水分达到要求为止。
       今天逛论坛,看到有人说聚乙二醇虽然分子量大,但这种浓缩方法也可能使一部分进入到透析袋中,想问问,聚乙二醇与蛋白质接触,会对蛋白质产生影响吗?我这种浓缩直接撒晶体的方法,对我的蛋白会有变性等影响吗?我的蛋白主要是碱性蛋白。谢了
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你的聚乙二醇没有活基团就不会有影响,也不起啥反应。
11楼2011-12-09 20:34:09
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zsy1106

金虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
nayitian_nan(金币+1): 谢谢,还好,我用的是水溶液,里外都是~ 2011-06-24 17:02:35
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-24 20:08:56
silicare(EPI+1): 2011-06-25 09:06:16
一般来说这样做不会有影响。楼主担心的话,可以试试别的方法啊。例如:
1、蛋白浓缩管——快且保险的方法;
2、用电风扇对着透析袋吹,或者实验室如果有抽干室或者干燥室,放进去,过一段时间去看看,水分就会少掉很多,虽然方法有点土,但是能用(我用过),但是这样做要注意的是,要求一定要低温保存的蛋白谨慎操作,毕竟电风扇不能放进冰箱,抽干室即使有空调温度也不会很低。
还有就是注意水分去掉后,除了蛋白浓缩了外,缓冲液的离子浓度之类的也会改变,有需要的话记得要调回去。
2楼2011-06-24 15:40:04
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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
silicare(金币+3, EPI+1): 2011-06-25 09:06:23
nayitian_nan(金币+2): 恩啊,就是的,是看了淀粉酶你给那个朋友的帖子,我考虑过超滤,但实验室条件有限,我打算透析完直接冷冻干燥,以前是聚乙二醇浓缩后冻干的~ 2011-06-25 09:47:53
你说看到那样说的那个人就是我,很聪明,懂得先搜集资料。但是PEG2万确实是有可能透得过排阻3500的透析袋的,虽然标明3千五的透析袋质量再差,有超过2万的孔径也少,但透析袋的排阻标准是球状蛋白质,PEG是线性的,理论上比3千5小的孔径也能进去。

你用了硫酸铵沉淀,下一步如果接上疏水层析也可以浓缩样品,我样品有二百多毫升的层析之后活力组分合并大概有50毫升,算是浓缩了,也纯化了好几倍,不过会有30%损失。

你也可以超滤,用滤膜,可以买超滤管离心,也可以买超滤膜开氮气加压。

至于PEG2万对你的蛋白质有没有影响就很难说了,蛋白质各有不同,谁都说不定,要先自己试。
3楼2011-06-24 23:17:49
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xiem188

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
nayitian_nan(金币+2): 操作步骤告诉我吧~ 2011-06-29 19:27:44
超滤不是很方便的啊
4楼2011-06-29 17:06:53
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简单回复
xuwei370814楼
2013-07-05 17:04   回复  
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