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sunmoods

金虫 (小有名气)

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[求助] DNA纯度检验

我提的土壤DNA，最后A260/A280,A260/A230检验
第一个A260/A280知道是看核算和蛋白污染的，在1.7-1.9为好
第二个是看腐殖酸类污染的，不知道怎么样的结果为好，是越大越好么，为什么。

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1楼 2011-06-21 21:06:58

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healerly

禁虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+6, EPI+1): 解释得很全面了 2011-06-22 09:18:38
sunmoods(金币+3): NICE 2011-06-22 18:35:09
sunmoods(金币+4): 2011-06-30 13:14:15

1. A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1）；
朗伯－比尔定律：
2. A280nm
是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液
3. A230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。