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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 化学发光问题求助
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刘延平

金虫 (小有名气)

[求助] 化学发光问题求助

在仪器检测化学发光信号时，仪器老是提示信号检测超出所能检测的线性范围，但是实际信号在仪器测试范围内，想问下是不是载体的纯在对化学发光及信号的检测产生了影响，如果是的话，是怎么个情况？最好说具体点，不胜感激
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1楼 2011-06-21 16:06:26
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beautybanana

木虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1): 鼓励 2011-06-22 17:12:03
引用回帖:
Originally posted by 刘延平 at 2011-06-21 16:06:26:
在仪器检测化学发光信号时，仪器老是提示信号检测超出所能检测的线性范围，但是实际信号在仪器测试范围内，想问下是不是载体的纯在对化学发光及信号的检测产生了影响，如果是的话，是怎么个情况？最好说具体点，不 ...

可以设置个无载体的对照，再把检测的样品稀释成几个梯度再检测看看...
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2楼2011-06-21 16:19:42
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zsy1106

金虫 (小有名气)
敢问楼主用的是板式还是管式？
发光底物是吖啶酯还是鲁米诺呢？
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3楼2011-06-21 16:53:25
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刘延平

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-21 16:53:25:
敢问楼主用的是板式还是管式？
发光底物是吖啶酯还是鲁米诺呢？

板式的，是鲁米诺发光体系，呵呵
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4楼2011-06-21 19:46:58
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刘延平

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-06-21 16:19:42:
可以设置个无载体的对照，再把检测的样品稀释成几个梯度再检测看看...

设置了，有的载体出现如题的情况，有的载体不出现，所以不好确定是不是载体的原因。
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5楼2011-06-21 19:48:03
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
刘延平(金币+20): 谢谢 2011-06-22 08:44:03
lstt09nk(金币+7): 感谢新虫参与 2011-06-22 17:11:44
引用回帖:
Originally posted by 刘延平 at 2011-06-21 19:48:03:
设置了，有的载体出现如题的情况，有的载体不出现，所以不好确定是不是载体的原因。

1、有的载体出现，有的不出现，个人觉得有可能是载体带来的问题。因为如果像楼主所说，读值会超出仪器检测范围的话，说明读值是很高的，在这么强的催化条件下，底物中的鲁米诺和氧化剂会被较快的消耗掉（通常我遇到这种情况时，读值已经远远超出检测的线性范围了），然后读值会迅速的降低。而板式化学发光的读值是1孔1孔读的，先读的孔，底物还没被消耗过多，就出现楼主说的状况，而后读的孔因为比较晚读，底物已消耗过多哦，读值已经下降，就不会出现超出的状况了。楼主可看一下数据，是否存在此规律？
2、如果出现这种情况，也未必是载体直接造成的，个人觉得可能因为载体的存在，导致板没有洗干净，游离HRP残留的可能性较大；
3、如果以上情况不符，楼主可以试试黑色的板，黑板因为不像白板反光，读值通常要低10倍，但因为本底也会低10倍，所以并不太会影响分析灵敏度。
最后祝楼主好运！
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6楼2011-06-21 20:38:24
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beautybanana

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-21 20:38:24:
1、有的载体出现，有的不出现，个人觉得有可能是载体带来的问题。因为如果像楼主所说，读值会超出仪器检测范围的话，说明读值是很高的，在这么强的催化条件下，底物中的鲁米诺和氧化剂会被较快的消耗掉（通常我 ...

我看分析的很有道理~可以分析下你的数据
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7楼2011-06-21 23:09:50
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刘延平

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-21 20:38:24:
1、有的载体出现，有的不出现，个人觉得有可能是载体带来的问题。因为如果像楼主所说，读值会超出仪器检测范围的话，说明读值是很高的，在这么强的催化条件下，底物中的鲁米诺和氧化剂会被较快的消耗掉（通常我 ...

谢谢你的详细分析，我还有问题不明白：我用的发光液是经过验证在5min之内是很稳定，甚至30min之内信号变化也不很大，对于随着时间信号的减弱可能不成立。如果纯粹用HRP和发光液进行化学发光检测，信号即使很高也仪器也不会出现提示；而将HRP接到载体上后，仪器有时会出现对话框提示信号检测超出所能检测的线性范围，实际信号没那么高（这点可以通过其它方法确定）。
如果您在这方面有所了解，还请给些见解，谢谢！
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8楼2011-06-22 09:01:42
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zsy1106

金虫 (小有名气)
白天想了想，暂时没有什么好的头绪了，抱歉啊！楼主如果有新的发现，可以再提供多一些资讯，一起讨论讨论。
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9楼2011-06-22 22:07:40
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2008102128

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by beautybanana at 2011-06-21 23:09:50:
我看分析的很有道理~可以分析下你的数据

楼主  你好 我也在做化学发光  我用游离的酶时 发光有持续性，但是做标记到载体后发光没了持续性 不到一分钟就达到峰值啊    能给分析一下吗？    谢谢你拉
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10楼2012-01-07 22:43:34
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