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刘延平

金虫 (小有名气)

[求助] 化学发光问题求助

在仪器检测化学发光信号时,仪器老是提示信号检测超出所能检测的线性范围,但是实际信号在仪器测试范围内,想问下是不是载体的纯在对化学发光及信号的检测产生了影响,如果是的话,是怎么个情况?最好说具体点,不胜感激
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beautybanana

木虫 (著名写手)


lstt09nk(金币+1): 鼓励 2011-06-22 17:12:03
引用回帖:
Originally posted by 刘延平 at 2011-06-21 16:06:26:
在仪器检测化学发光信号时,仪器老是提示信号检测超出所能检测的线性范围,但是实际信号在仪器测试范围内,想问下是不是载体的纯在对化学发光及信号的检测产生了影响,如果是的话,是怎么个情况?最好说具体点,不 ...

可以设置个无载体的对照,再把检测的样品稀释成几个梯度再检测看看...
2楼2011-06-21 16:19:42
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zsy1106

金虫 (小有名气)

敢问楼主用的是板式还是管式?
发光底物是吖啶酯还是鲁米诺呢?
3楼2011-06-21 16:53:25
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刘延平

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-21 16:53:25:
敢问楼主用的是板式还是管式?
发光底物是吖啶酯还是鲁米诺呢?

板式的,是鲁米诺发光体系,呵呵
4楼2011-06-21 19:46:58
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刘延平

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-06-21 16:19:42:
可以设置个无载体的对照,再把检测的样品稀释成几个梯度再检测看看...

设置了,有的载体出现如题的情况,有的载体不出现,所以不好确定是不是载体的原因。
5楼2011-06-21 19:48:03
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
刘延平(金币+20): 谢谢 2011-06-22 08:44:03
lstt09nk(金币+7): 感谢新虫参与 2011-06-22 17:11:44
引用回帖:
Originally posted by 刘延平 at 2011-06-21 19:48:03:
设置了,有的载体出现如题的情况,有的载体不出现,所以不好确定是不是载体的原因。

1、有的载体出现,有的不出现,个人觉得有可能是载体带来的问题。因为如果像楼主所说,读值会超出仪器检测范围的话,说明读值是很高的,在这么强的催化条件下,底物中的鲁米诺和氧化剂会被较快的消耗掉(通常我遇到这种情况时,读值已经远远超出检测的线性范围了),然后读值会迅速的降低。而板式化学发光的读值是1孔1孔读的,先读的孔,底物还没被消耗过多,就出现楼主说的状况,而后读的孔因为比较晚读,底物已消耗过多哦,读值已经下降,就不会出现超出的状况了。楼主可看一下数据,是否存在此规律?
2、如果出现这种情况,也未必是载体直接造成的,个人觉得可能因为载体的存在,导致板没有洗干净,游离HRP残留的可能性较大;
3、如果以上情况不符,楼主可以试试黑色的板,黑板因为不像白板反光,读值通常要低10倍,但因为本底也会低10倍,所以并不太会影响分析灵敏度。
最后祝楼主好运!
6楼2011-06-21 20:38:24
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beautybanana

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-21 20:38:24:
1、有的载体出现,有的不出现,个人觉得有可能是载体带来的问题。因为如果像楼主所说,读值会超出仪器检测范围的话,说明读值是很高的,在这么强的催化条件下,底物中的鲁米诺和氧化剂会被较快的消耗掉(通常我 ...

我看分析的很有道理~可以分析下你的数据
7楼2011-06-21 23:09:50
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刘延平

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-21 20:38:24:
1、有的载体出现,有的不出现,个人觉得有可能是载体带来的问题。因为如果像楼主所说,读值会超出仪器检测范围的话,说明读值是很高的,在这么强的催化条件下,底物中的鲁米诺和氧化剂会被较快的消耗掉(通常我 ...

谢谢你的详细分析,我还有问题不明白:我用的发光液是经过验证在5min之内是很稳定,甚至30min之内信号变化也不很大,对于随着时间信号的减弱可能不成立。如果纯粹用HRP和发光液进行化学发光检测,信号即使很高也仪器也不会出现提示;而将HRP接到载体上后,仪器有时会出现对话框提示信号检测超出所能检测的线性范围,实际信号没那么高(这点可以通过其它方法确定)。
如果您在这方面有所了解,还请给些见解,谢谢!
8楼2011-06-22 09:01:42
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zsy1106

金虫 (小有名气)

白天想了想,暂时没有什么好的头绪了,抱歉啊!楼主如果有新的发现,可以再提供多一些资讯,一起讨论讨论。
9楼2011-06-22 22:07:40
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2008102128

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by beautybanana at 2011-06-21 23:09:50:
我看分析的很有道理~可以分析下你的数据

楼主  你好 我也在做化学发光  我用游离的酶时 发光有持续性,但是做标记到载体后发光没了持续性 不到一分钟就达到峰值啊    能给分析一下吗?    谢谢你拉
10楼2012-01-07 22:43:34
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