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PCR扩增产物电泳,退火温度优化
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bear0329
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PCR扩增产物电泳,退火温度优化
各位虫友,我做的16SrDNA扩增后的片段进行1%琼脂糖凝胶电泳(见图),扩增时,1~12泳道的退火温度分别是从50~61度,后续要回收目的片段,那么哪个温度的好一点呢?依据是什么?先谢谢各位了!
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2011-06-21 10:11:22
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amilie030312
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引用回帖:
Originally posted by
bear0329
at 2011-06-23 09:00:44:
谢谢你!我是要回收目的片段做酶切的
我觉得引物特异性不太好,如果后续实验要求完美则重新设计引物,如果不重新设计那再升高些温度提高特异性看看是不是杂带会少些。如果切胶回收怕你这里面有片段比较接近的片段,后续酶切就会有些问题。
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13楼
2011-06-23 10:31:33
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【答案】应助回帖
bear0329(金币+2): 好的,谢谢啦~要是换了引物是不是要重新选择退火温度啊 2011-06-21 10:56:42
你看哪条带亮就选那个退火温度进行大批量PCR。
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2楼
2011-06-21 10:49:47
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如果是亮度差不多的话,我建议用退火温度较高的回收,因为这样的条带特异性高
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2011-06-21 15:09:39
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bear0329
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引用回帖:
Originally posted by
zboter
at 2011-06-21 15:09:39:
如果是亮度差不多的话,我建议用退火温度较高的回收,因为这样的条带特异性高
恩,谢谢啊,那就选9号产不多吧?
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以马内利!
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2011-06-21 15:19:03
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