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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何确定启动子
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匿名

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1楼 2011-06-16 10:51:47
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angellover11

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 啮风 at 2011-06-16 13:14:59
已知全基因组序列，上有一个调控基因，请问如何确定它的启动子
+++++++++++++++++++++++因为楼主的专业上面写的是微生物生理类，所以我仅以简单的原核生物为例来回答这个问题。
正如三楼回答的，有许多网站可以预 ...

引物延伸分析一般实验室可以做的吗？查资料好像要用到放射性元素，是不是达到一定标准的实验室才可以做，或者有没有一些公司做这些服务的呀？
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16楼2014-05-05 18:58:39
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
wickhamhan(金币+3): 2011-06-16 14:18:32
dhd997(金币+2): 鼓励之，看楼下 2011-06-16 15:00:29
往这个基因前面基因的终止子（TGA）前面扩上100bp,这是保证这个基因能带上启动子最稳妥的方法。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-06-16 12:04:12
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wickhamhan(金币+2): 2011-06-16 14:18:41
dhd997(金币+2): 鼓励 2011-06-16 15:00:42
有网址可以预测，但也是预测而已，最好是把这段基因弄下来搞到一个操纵子上游，看其能否启动这个操纵子表达
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在等待中涅槃重生
3楼2011-06-16 12:37:10
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啮风

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
wickhamhan(金币+3): 2011-06-16 14:18:46
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-06-16 15:00:53
已知全基因组序列，上有一个调控基因，请问如何确定它的启动子
+++++++++++++++++++++++因为楼主的专业上面写的是微生物生理类，所以我仅以简单的原核生物为例来回答这个问题。
正如三楼回答的，有许多网站可以预测原核生物的启动子区，注意是区，里面包含了，启动子区的核心要素：-35，-10， 转录起始为点。但是这是经验预测，那么如果你要发文章确认这一段DNA序列，那么你首先确认转录起始位点，一般是引物延伸分析（primer extension analysis），这个位点确认好后，然后再结合生物信息学预测，上推10个，35个BP，一般就OK了。当然，还有一种就是我只要这一段，我不需要具体的位点信息，那么一般是在这个基因的上游，分别取ATG上游100BP， 101-200BP等等，然后将这些片断分别连接到无LAC启动子区的LACZ基因上游（这个LACZ基因是没有本身启动子的，基因的表达就要依赖你连接片断启动子活性的有无），然后通过IPTG诱导，测量半乳糖苷酶的活性来找到这个启动子区。
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4楼2011-06-16 13:14:59
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