应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR 扩全长
212/3返回列表上一页123下一页
查看: 2450  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

夏尔list

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 对照不可少 2011-07-07 17:30:26
之前我也有一个没有扩出来，那个很变态的。开始区GC含量很高，几乎就没什么AT。两个月没弄出来跟老师说了就换其他的了，别的扩了一次就扩出来了。其实说实话，扩不出来就是扩不出来，一般引物温度什么的问题都不是很大，RNA质量啊当然有关系，不过现在试剂盒什么的都应该很好用了，你问师兄师姐要点cDNA不同的扩一下，Actin也扩一下，再扩不出来就不是你的问题了。扩不出来很正常的。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-06-24 14:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidongqiao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rb at 2011-06-23 23:16:15:
反转录试剂盒是哪家的？千万不要是takara，takara定量pcr的是短片段的。很多没有详细说明的反转录试剂盒供定量PCR使用的是很难得到全长产物的。我4年前吃过这个亏的。

我用的是invitrogen的反转录试剂盒，我把800BP的条带去测序了，发现不是我的全长，不知道问题出在哪里了
赞一下 回复此楼
12楼2011-07-06 16:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-07-07 17:30:45
引用回帖:
Originally posted by lidongqiao at 2011-07-06 16:23:18:
我用的是invitrogen的反转录试剂盒，我把800BP的条带去测序了，发现不是我的全长，不知道问题出在哪里了

你可以用一下特定引物的rt（针对你的基因设计反转录引物），然后用高保真酶在做PCR，我当年喜欢用 Advantage® 2 DNA Polymerase Mix ，效果很理想。你可以试试。
赞一下(1人) 回复此楼
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家，他们每天都在思考人类最根本的三个问题：你是谁？你从哪儿来？要去哪儿？
13楼2011-07-06 16:42:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengmenglu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 可行 2011-07-07 17:31:05
这个，你才三个月，所以继续吧，我是扩了快一年才出来！你试一下梯度，找出最适的温度吧！
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2011-07-07 15:44:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feirlu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+4): 新人鼓励 常来 2011-09-08 17:04:46
看天(金币+4): 新人鼓励 常来 2011-09-08 17:05:07
看天(金币+4): 新人鼓励 常来 2011-09-08 17:05:26
引用回帖:
14楼: Originally posted by mengmenglu at 2011-07-07 15:44:27:
这个，你才三个月，所以继续吧，我是扩了快一年才出来！你试一下梯度，找出最适的温度吧！

不是吧？一年？我跟楼主有同样情况，cox亚基1一扩就扩出来了，亚基2跟亚基3到现在都很离谱，扩出来2次，但再在扩出来的温度条件下扩，就什么都没有，touchdown pcr也试过了，没个反应的都，扩出来过肯定不是引物问题，模板已经用其它引物确定没问题，请教下该如何改进呢？
赞一下(3人) 回复此楼
15楼2011-09-08 16:51:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feirlu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看天: 这个不算应助 2011-09-08 17:07:18
楼主现在扩增的怎么了？我的情况也类似啊。。。
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2011-09-08 16:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-09-17 13:17:09
楼主，你看看是不是你的GC含量很高的啊？
实在不行，你就分段扩，在连起来
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2011-09-17 10:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

320080920001

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-09-17 13:16:08
高GC含量的PCR可以加入一些甜菜碱或者甘油，不知道楼主的Marker使用的是哪的，貌似今天刚听师兄说天根的marker不准。还有，上样孔有亮点我觉得除了样品不纯没有其他解释吧，如果你减少胶浓度，还有亮点的话，我觉得只能说明是有蛋白污染了。
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2011-09-17 11:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以尝试把全长分两段扩，然后再把两段连起来，这样比较容易，而且碱基变异的概率低。
赞一下 回复此楼
19楼2011-09-17 13:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

320080920001

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

19楼说的很对啊，我之前去过的实验室用LIC系统，可以最多把7段片段连起来，效率很高啊。
赞一下 回复此楼
20楼2011-09-18 10:30:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lidongqiao 的主题更新
212/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +4 红衣隐官 2026-03-21 4/200 2026-03-21 13:21 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +13 曦熙兮 2026-03-15 13/650 2026-03-20 19:35 by Dream007008
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭