应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR 扩全长
52/1返回列表
查看: 2436  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lidongqiao

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR 扩全长

各位高手，我现在在扩基因全长，扩了3个月了，一点结果也没有。具体情况是跑电泳结果是点样孔处有亮带，其他什么都没有，开始我认为是不是当时提的RNA不纯，里面还有蛋白质或DNA，所以又重新提了一次，结果还是这个样子。
序列1的5端到3端sense primer:ATGGAGGTACAGAGAGTTCAAG
            5端到3端antisense primer:TCACTGTGGAAGCTTGTTTAAC
序列2的5端到3端sense primer:ATGGTTCAAGCAGAAATGGT
             5端到3端antisense primer:TTACACGGTTAAGTTCCTGGT
退火温度从65到53都试过了，也还是不行：也用过touchdown好多次，还是不行，怎么解决呢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-06-15 16:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏尔list

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 对照不可少 2011-07-07 17:30:26
之前我也有一个没有扩出来，那个很变态的。开始区GC含量很高，几乎就没什么AT。两个月没弄出来跟老师说了就换其他的了，别的扩了一次就扩出来了。其实说实话，扩不出来就是扩不出来，一般引物温度什么的问题都不是很大，RNA质量啊当然有关系，不过现在试剂盒什么的都应该很好用了，你问师兄师姐要点cDNA不同的扩一下，Actin也扩一下，再扩不出来就不是你的问题了。扩不出来很正常的。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-06-24 14:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

love_st

金虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:33:00
帮你看了下第一对的上下游引物，下游引物二聚体稍微有点大，引物之间的二聚体也稍微有点，不过应该影响不大的，你应该再提供下其它的信息
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-15 16:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:33:06
才提几次RNA  提了十次再来说技术问题。 实验就是熟能生巧。  我认为你的问题是RNA的纯度。以及后续反转cDNA的问题。和引物关系不大
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-15 17:42:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidongqiao

铜虫 (小有名气)
★ ★
silicare(金币+2): 鼓励交流 2011-07-07 17:28:58
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-06-15 16:50:35:
帮你看了下第一对的上下游引物，下游引物二聚体稍微有点大，引物之间的二聚体也稍微有点，不过应该影响不大的，你应该再提供下其它的信息

谢谢，我扩的全长是1000多bp，第一对引物，软件上给的上游的退火温度是52.9，下游是55度，送到生工去合成后，反馈回来写的第一对引物上游是58.21度，下游是56.35，第二对引物，软件上给的上游的退火温度是54.5，下游是53.7度，送到生工去合成后，反馈回来写的第一对引物上游是54.4度，下游是56.06，你看按哪个说的好些？是软件上的还是合成后订单上给的呀
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-15 19:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭