| 查看: 4119 | 回复: 10 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
质粒转化
|
|||
|
最近做质粒转化实验总是不成功。我的具体方法是： 1. 取100μl 感受态细胞于冰浴上融化。 2. 加入1μl 纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30 min。 3. 将菌液放入42℃水浴中热激90 秒，立即放入冰浴中2 min。 4. 加入0.9ml LB液体（提前37℃预热），于37℃恒温摇床上200rpm×50min 温育。 5. 将菌液5000rpm/min 离心5min，留200μl上清将菌体打散，均匀涂布于含适当 抗生素的琼脂平板表面（已提前涂布好抗生素，并预热），平板于37℃倒置培养过夜。 我的质粒（别人赠送）是PET-28a，质粒基因上有EcoRI及NheI酶切位点。但我的实验用不到酶切位点，只是要用里面的基因，所以我就没管酶切位点。再就是抗生素，因为PET-28a是卡那霉素抗性。我就先配成10mg/mL母液，置于-20℃保存。使用时再稀释成50ug/mL的工作液浓度。由于技术水平有限，我是将平板准备好后，在上面涂80uL的抗生素（50ug/mL）。 以上就是我的实验流程。但是我转了几次，只有第一次出现单菌落，其余几次都没有单菌落。在没有出现单菌落的情况下，我想试试是不是有菌产生，就把菌挑到LB液体中培养，但没有培养成功。 恳请各位高手指教！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有125人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
gwbk
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 54
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2293.5
- 红花: 24
- 帖子: 529
- 在线: 186.9小时
- 虫号: 1320681
- 注册: 2011-06-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
7楼2011-06-15 19:54:51
yabxxh
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 14
- 应助: 22 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2238
- 散金: 98
- 红花: 9
- 帖子: 465
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 157001
- 注册: 2006-01-05
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2011-06-15 13:29:48
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
3楼2011-06-15 13:31:12
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16382.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3648
- 在线: 288.2小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
4楼2011-06-15 15:44:31