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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 16srDNA扩增问题,急

PCR体系
     总体积                 30 μl
10×Buffer              3 μl
dNTP(0.25 mM)          0.5 μl
Taq DNA polymerase      0.3 μl
27F(25μM)              1 μl
907R(25μM)             1 μl
BSA                    0.2 μl
模板DNA               1 μl
ddH2O                  13 μl
PCR程序
94℃预变性3min,94℃变性1min,54℃退火45s,72℃延伸90s,32个循环,72℃延伸10min。
PCR结果:

怎么有的扩增了有的没有扩增到啊,提取的时候都是有的。PCR体系和程序有什么问题吗?还有就是,PCR产物ED染色后跑胶检测,开始就拍到上图,过了一会连MARKER都很淡了,这又是为什么啊?谢谢了

[ Last edited by bear0329 on 2011-6-13 at 21:16 ]
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以马内利!
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bear0329

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-06-15 09:56:40:
dNTP(0.25 mM)          0.5 μl

dNTP浓度应该为2.5mM吧,然后加2 uL。

非常感谢啊
以马内利!
17楼2011-06-15 10:26:47
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lbzx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
bear0329(金币+1): 谢谢你啊~很有用,明天试试~ 2011-06-13 23:20:32
西瓜(金币+3): Good 2011-06-13 23:58:05
1、DNTP 加到2ul
2、模板稀释20倍好了
3、用EB染色的吧,浓度加大
2楼2011-06-13 21:36:22
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bear0329

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lbzx at 2011-06-13 21:36:22:
1、DNTP 加到2ul
2、模板稀释20倍好了
3、用EB染色的吧,浓度加大

谢谢啊,程序问题不大吧?
以马内利!
3楼2011-06-13 21:42:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

关于条带变淡的问题,那是因为看胶时时用紫外照射的,而紫外线会使DNA降解,故在紫外线照射下条带会逐渐变淡。下次操作最好快点噢。
4楼2011-06-13 23:59:53
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