我最近一直在做膜蛋白与GFP融合蛋白的表达，但是诱导表达后菌株没有荧光，看了一些文献，用TMHMM软件预测了一下膜蛋白与GFP融合的蛋白，发现整个融合蛋白的# Sequence Total prob of N-in: 0.22693 也就是说N端在细胞膜内的可能性非常非常低，我的膜蛋白有2个跨膜区的，4个跨膜区的，6个跨膜区的，为啥在膜蛋白的C端连上GFP后，整个融合蛋白的N端和C端都朝向细胞膜外呢，文献中记载如果GFP在细胞周质中也就是在细胞膜外就不会发出荧光，怎么办呢？郁闷死了，实验都进行不下去了，哪位大侠遇到过这样的情况，对TMHMM软件了解的多一些，可否指点我一下，感激不尽啊。
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