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[求助]
向MTT实验高手求助！！！
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有哪位高手MTT实验做的比较好啊？希望能和我交流一下。最近实验进入困境了，总是做不出结果来，呜呜…… 设置六个平行，但是平行性很差，先开始以为是细胞铺的不均匀，后来很注意，就及时吹打细胞悬液，保证细胞均匀分散，但结果依然不理想。 实验的重现性也很差，这次和下次做的结果的规律都不一样，真不知道为什么会这样 细胞需要每天换液吗？如果培养７天，每天换液会对结果产生很大误差，不换液我觉得细胞状态肯定会不好，最后都不能说明到底是药物对细胞的影响还是培养基成分的改变引起细胞增殖情况的改变。 希望高手看到后及时回帖，不胜感激！！！ |
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terry130
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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lstt09nk(金币+5): 很热心，希望对楼主有所帮助 2011-06-12 19:19:54
lstt09nk(金币+5): 很热心，希望对楼主有所帮助 2011-06-12 19:19:54
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换液并不是一定要每天换，根据细胞状态而定，对于生长不是很快的细胞，太频繁的换液反而会伤害细胞。在进行MTT实验前，你要对自己的细胞足够的了解，大体知道他的生长速度，传代条件也基本清楚。当你确定好最佳的传代时间之后，再开始MTT实验。影响MTT重现性的最主要因素是用于每次实验的细胞的同一性。对于某些细胞比如一些非永生的上皮细胞系，不同的代数其生理特性都有差别的。因此在引入MTT实验时要尽量保证细胞的代数相同，当然有些时候也不这么严格也能得到不错的重现性。AT your discretion。另外在整个实验过程中所有孔的换液操作都要完全一致，即使是control也要随着其他孔药液的更换而用替代的medium来做一次换液，这样才能保证均一。 如果要确定引入细胞的代数相同的话，可以冻存一批细胞，然后每次重复试验都复苏一管并传代固定代数后进行MTT试验，这样会增加试验的重复性。 |
3楼2011-06-12 08:06:29