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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实验求助，高价悬赏，标题要长。。。。。。
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yalong

木虫 (小有名气)

[求助] 实验求助，高价悬赏，标题要长。。。。。。

背景资料：基因工程菌 Pseudomonas  putida  SM1443::gfp2x  (pJP4::dsRed),由德国 S.  Bathe 教授赠送.该菌携带的pJP4 质粒上,带有编码2,4-D降解功能的完整基因簇(tfd),染色体上带有 gfp标记基因和 lacq基因,质粒 pJP4 带有 dsRed 标记基因.在没有 IPTG 诱导条件下,  lac 启动子控制的 dsRed 被阻遏,P.  putida 无法表达红色荧光蛋白,只能表达绿色荧光蛋白.当 pJP4  转移到其他微生物体内,LacI 阻遏解除,接受质粒的接合子会发出红色荧光.
       我想把上面所说的降解基因替换成我想要的基因，有哪位大虾做过类似的实验，给我点参考资料，还有就是你要是有这个工程菌的话，能不能赠与小弟啊
      
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1楼 2011-06-10 16:38:31
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

yalong(金币+1): 谢谢 2011-06-14 17:40:49
按照你想要的基因的编码区设计引物，引入合适酶切位点，把质粒上降解基因切下来连上你的基因就可以了！
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3楼2011-06-12 12:05:28
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
yalong(金币+2): 谢谢 2011-06-12 16:05:52
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-06-12 17:50:26
找降解基因两端的酶切位点，同时设计PCR引物引入相同的酶切位点到你想要的基因两端，然后分别酶切，连接就是了。
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2楼2011-06-12 11:54:59
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
yalong(金币+2): 谢谢 2011-06-12 16:06:04
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-06-12 17:50:50
引用回帖:
Originally posted by yguang at 2011-06-12 12:05:28:
按照你想要的基因的编码区设计引物，引入合适酶切位点，把质粒上降解基因切下来连上你的基因就可以了！

按照你想要的基因的编码区设计引物，引入合适酶切位点，扩增出你想要的基因，把质粒上降解基因切下来连上你的基因就可以了！  

应助帖写作了还不能编辑，只好重写了！
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4楼2011-06-12 12:08:29
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yalong

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-12 11:54:59:
找降解基因两端的酶切位点，同时设计PCR引物引入相同的酶切位点到你想要的基因两端，然后分别酶切，连接就是了。

你们实验室有没有这株菌啊？
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5楼2011-06-16 18:45:14
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