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p120933799金虫 (小有名气)
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[求助]
DNA溶解小问
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| 我用CTAB方法提取真菌DNA，基本上是严格按照操作，可最后加TE后总有不溶解透明物质，在65℃下也不溶解，请问为何？如何可避免，以往也遇到很多这种情况， |
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- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
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CTAB法太繁琐了，看我的 2.4.14.1真菌总DNA的提取 （1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天； （2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体； （3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状； （4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min； （6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）； （7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 离心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀； （10）电泳检测总DNA的浓度。 （5）DNA抽提液的配置 表 2.5 DNA抽提液的配置 成分 浓度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L |
3楼2011-06-14 21:33:42