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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 一般筛菌的步骤
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过分低调

木虫 (正式写手)

[交流] 一般筛菌的步骤 已有16人参与

这学期做菌种筛选有2个多月了，从一无所知到现在基本有些眉目。我把我做的一些工作晒出来。希望大家指正，同时也方便一些和我一样的新手少走弯路。

第一：找文章。我筛的是纤维素分解菌。开始随便找了几篇中文综述，看了一下人家的方法和培养基。就开始自己捣鼓了。菌是长了，可不知道长的是些什么。接下来做什么都不知道。建议找一些重点大学的硕士毕业论文，参照一下他们的东西，自己在理清一下思路。
第二：实验用品，器材的准备。一定要提前准备好。最好是列个清单。我当时做了准备去看显微镜，结果染色剂什么都没买，还有就是培养中需要的一些药品都没订。
第三：一定要当回事去做，就是实验一定要严谨。要不怕苦。筛菌是个很累的活，挑菌落可能一次就上百个平板的。我因为怕累，就每次只做了20个左右，结果每次都分不开，纯菌株是那么的难分到。
第四：先筛到你需要的菌，之后你就可以做pH，温度，营养元素的优化工作了，最后可以拿去诱变而提高酶活了。
以上是我的一点粗微的心得。
我筛纤维素分解菌，参考的是一篇兰州大学的硕士论文。
1，配置一个CMC-Na培养基。pH大概5.3左右，没调的。把样品稀释后涂布到平板上，30度培养4到5天，观察其生长。看到有单菌落我就划线分离。
2，刚果红染色。文献上说的染色时间都不一样。我是2个小时。反正效果不错。确实可以看到水解圈的。
3，挑选液体发酵培养。测CMC酶活。具体就这些。其他的镜检我都没做。接着要做了。对了，现在这个天培养基长蛆，不知道是什么原因了。

后面的工作希望那位大神帮忙指点下  让我有一个更清晰的思路。谢谢！
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兄友弟恭朋睦友信
1楼 2011-06-08 14:02:58
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静文

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知道楼主是否方便传一下你的透明圈图片看看呢？我的做出来不是很明显，我都不知道应该是啥样子，自己做的这个是不是透明圈...万分感谢！！
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我爱我师,我更爱真理!
9楼2012-06-04 23:47:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你的培养基进去果蝇产卵了
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-06-08 14:59:20
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下弦日

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请教楼主具体是怎么染色的？
好像还要用NaCl脱色，我做的怎么看不到水解圈？
赞一下(1人) 回复此楼
学海无涯
3楼2011-06-09 15:56:20
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过分低调

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 下弦日 at 2011-06-09 15:56:20:
请教楼主具体是怎么染色的？
好像还要用NaCl脱色，我做的怎么看不到水解圈？

1mg/ml的刚过红染色1小时左右   水洗后加1N的氯化钠浸泡1h   接着水洗  就ok了
赞一下 回复此楼
兄友弟恭朋睦友信
4楼2011-06-09 16:20:01
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查看全部 28 个回答
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