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30937747

木虫 (小有名气)

[求助] [求助]高保真酶扩不出来

我提取RNA做反转录得到cDNA,以cDNA为模板做PCR,用普通taq酶扩出来的片段很亮,而且专一性很好,但是换高保真酶都扩不出来,换了两种酶,温度梯度和浓度梯度都做了,延伸的时间也增长了一倍.但是就是没有结果,请问有什么好的建议吗?
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我依旧会努力.
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧

taq加pfu,9比1。
如果片段不长,直接taq就行了,突变率不会太高的,多送几个测序就是了。建议PCR做15-20个循环就可以了,最好不要超过25个。
找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
10楼2011-07-10 08:08:51
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