| 查看: 3085 | 回复: 22 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
yesucao木虫 (正式写手)
|
[求助]
质粒提取
|
||
|
不知道为什么最近两次提取的质粒老是如图这样子，条带模糊、弥散。挑取的是转化子 摇菌、使用溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和醋酸铵和氯化锂提取的，前几天刚提过其他的质粒，能提好，不存在试剂的问题（不过挑取转化子时没提好，之后甘油管活化再挑取的单菌落才提好）；每次都是本人亲自动手，应该也不存在操作问题吧！ 还请各位大虾帮忙分析一下，中间一个是Marker（4微升点样），其他均为质粒（5微升点样）  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有168人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有1人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
|
15000bp的Marker，转化子是pHT304 具体步骤： 1．将1.5ml菌液以13000g离心30秒（所有离心均在室温下进行），弃去上清液。 2．加入100μl溶液Ⅰ，振荡使菌体充分分散，室温放置2min 3．加入200μl新配置的溶液Ⅱ，轻轻将离心管颠倒数次，混匀内容物，室温放置2min 4．加150μl冰预冷的溶液Ⅲ，轻轻将离心管颠倒数次，直至白色沉淀充分形成，冰浴3min后，以13000g离心3min. 5．小心转移上清液，并加入两倍体积95%乙醇，室温放置5min后，以13000g离心4 min,尽弃上清。 6．用200μlTE或无菌双蒸水溶解沉淀物后，加入150μl溶液Ⅳ（醋酸铵）和150μl溶液Ⅴ（氯化锂），充分混匀后冰浴3min，然后以13000g离心3min 7．小心转移上清，并加入2倍体积95%乙醇，室温放置3min后以13000g离心5min 8．弃尽上清，沉淀用70%无水乙醇洗涤两次后，倒尽乙醇，用真空浓缩仪抽干3min或自然晾干 9．用20μl无菌双蒸水溶解DNA沉淀，同时加入1μlRNase(10μg/μl),37℃水浴10min后于-20℃保存备用。 |
9楼2011-06-02 10:57:01
★ ★ ★
yesucao(金币+3): 实验室的溶液2是高浓度的，放在室温有一段时间了，对于保存时间和问题之前没多大考虑 2011-06-01 17:49:55
yesucao(金币+7): 2011-06-01 17:50:15
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-01 18:26:53
yesucao(金币+3): 实验室的溶液2是高浓度的，放在室温有一段时间了，对于保存时间和问题之前没多大考虑 2011-06-01 17:49:55
yesucao(金币+7): 2011-06-01 17:50:15
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-01 18:26:53
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2011-06-01 13:32:05
3楼2011-06-01 14:16:54
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2011-06-01 17:40:54
30