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lizhijiang木虫 (著名写手)
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求教MCA-peptides 降解位点的测定！
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各位老师，前辈和虫友，大家好： 小虫利用某种蛋白酶降解几种MCA-peptides，想测定这种酶降解肽的肽键位点及能力。十种肽为： Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-MCA Boc-Phe-Ser-Arg-MCA Z-Ala-Ala-Asn-MCA Suc-Ile-Ile-Trp-MCA Boc-Val-Pro-Arg-MCA Suc-Ala-Pro-Ala-MCA ac-Asp-Glu-Val-Asp-MCA Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-MCA Suc-Ala-Glu-MCA Val-Lys-Met-MCA. 根据资料显示（参照外文，不知道翻译和理解有没有错误！），可以将这些底物与酶进行反应，TCA终止反应后，将反应体系用HPLC进行分别测定各反应体系与空白中某种肽的含量，可知这种酶是否能够降解多肽。然后，裂解位点用氨基酸测序仪来完成。恳请好友指点： 1、用HPLC评价这种蛋白酶是否能够降解，此种方法可行？是不是每个多肽都得测定标准曲线，然后还得已知裂解下来的某种氨基酸或小肽的图谱，才能够知道是否裂解和裂解了多少？ 2、如果1方法理解无误，这种酶能够水解多肽，那么，如何用氨基酸测序仪测定裂解为点？不太懂这方面知识，恳请提供资料和指导。同时，恳请方案方面的意见和建议。 金币不多，屈膝请教！知识以授，奈何金币？ [ Last edited by lizhijiang on 2011-5-29 at 09:24 ] |
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