应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何洗去填料中的乙醇?
81/1返回列表
查看: 1840  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 BioEPI ，点击这里进行查看

hanling.20

木虫 (小有名气)

[交流] 如何洗去填料中的乙醇?

买回来的胰蛋白酶-琼脂糖凝胶4B 是保存在20%乙醇里的,如果使用的话要怎么洗去乙醇呢,以前没做过这方面的,有知道的告诉我一下哈~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-05-21 16:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deblway

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
hanling.20(金币+1): 2011-06-06 08:07:20
有那种类似于提取质粒的柱子，不过要大很多！专门用来手提蛋白的，直接离心去掉酒精！然后用你的结合缓冲液（一般购买填料时均有说明书说明配置方法）加入柱子中重悬你的填料，然后离心去除。。重复几次即可！不用保存的时候也将填料放置在结合缓冲液里。。。乙醇还是比较好去除的。。。一般的水相缓冲液都可以去除。。当然如果用蛋白纯化系统的话，会更简单些。。直接装柱，用结合缓冲液一直冲到电导率稳定了就行了。。。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-02 15:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
hanling.20(金币+1): 2011-06-06 08:07:27
引用回帖:
Originally posted by deblway at 2011-06-02 15:44:46:
有那种类似于提取质粒的柱子，不过要大很多！专门用来手提蛋白的，直接离心去掉酒精！然后用你的结合缓冲液（一般购买填料时均有说明书说明配置方法）加入柱子中重悬你的填料，然后离心去除。。重复几次即可！不用 ...

20%乙醇是没有电导率的
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-02 18:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-02 20:38:19
hanling.20(金币+1): 2011-06-06 08:09:21
我们是这么做的：

1）胶沉积后，先将上层的溶液吸走，加入buffer,继续沉积，这样可以除去一部分的乙醇。
2）上柱。用buffer一直冲，冲到出来的溶液没有酒精的味道。一般用1到2天冲完就基本没有乙醇了。

另一种方法要取决于粒径大小。用专门的洗胶布用蒸馏水一直冲，冲完上柱，用需要的buffer冲，但是这种方法经常会损失一部分胶。



[ Last edited by zhengfan1109 on 2011-6-2 at 19:21 ]
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-02 19:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
hanling.20(金币+2): 2011-06-06 08:09:28
amisking(金币+5, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-18 20:45:02
我没有用过这个填料，只用过凝胶过滤柱、离子交换层析柱、疏水层析柱、镍柱，所以以下发言仅供参考。

我做层析的时候最后一步是将层析柱保存在20%乙醇中，下一次再用的时候首先就是用去气的超纯水冲洗层析柱，只要冲洗两个柱床体积就能去掉乙醇了。我觉得填料要用的时候是要装成层析柱的，你为什么要等胶沉下去，与液体分层之后去吸液体呢？胶不重，肯定是有一点被吸上去，会有损失的。而且买来的胶，用来保存的液体不会多的，最多只是超出胶面一点儿。所以我很不建议这样做。

买回来的填料最好别用缓冲液冲洗，第一步应该是去掉乙醇，因为你不知道缓冲液会不会跟乙醇有什么反应，虽说可能性不大，但还是先用去气的超纯水或者双蒸水冲洗起码2个柱床体积，把里面的所有液体置换掉，这才用缓冲液去洗。

另外，我不理解为什么要冲洗1到2天，是这个层析柱体积特别特别大，是工厂里用的，还是流速特别小？如果流速小，那么填料估计已经变形堵塞了，新买的不大可能就挂了吧？

所以我的建议，就是直接装柱，用去气的超纯水或者双蒸水冲洗起码2个柱床体积（可以冲洗多倍体积），把里面的所有液体置换掉，而这个过程应该不久，除非真是填料挂了。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-06-03 00:59:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
刚收到短消息，楼主给了2个金币，就看一下帖。3天过去了，不知道楼主进展如何。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-06 15:39:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
662106楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-06-03 00:59:46
我没有用过这个填料，只用过凝胶过滤柱、离子交换层析柱、疏水层析柱、镍柱，所以以下发言仅供参考。

我做层析的时候最后一步是将层析柱保存在20%乙醇中，下一次再用的时候首先就是用去气的超纯水冲洗层析柱，只 ...

嗯 嗯 嗯 我就是这样做的 哈哈哈 然后再问你个问题哈 就是多糖液做离子交换的时候 能不能用乙酸铵或者氯化铵做缓冲液的啊？？我用的填料是QFF的(Q sepharose fast flow)，大侠 急助！！！还有就是另外一个问题， 我以前师兄是用PBS去缓冲柱子的，进行柱平衡，但是他后面是用氯化钠进行洗脱的，那这样可以么？？？
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-02 13:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2452993楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-11-02 13:58:30
嗯 嗯 嗯 我就是这样做的 哈哈哈 然后再问你个问题哈 就是多糖液做离子交换的时候 能不能用乙酸铵或者氯化铵做缓冲液的啊？？我用的填料是QFF的(Q sepharose fast flow)，大侠 急助！！！还有就是另外一个问题， 我 ...

不好意思，我没纯化过多糖。
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-02 14:07:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hanling.20 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭