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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何洗去填料中的乙醇?
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hanling.20

木虫 (小有名气)

[交流] 如何洗去填料中的乙醇?

买回来的胰蛋白酶-琼脂糖凝胶4B 是保存在20%乙醇里的,如果使用的话要怎么洗去乙醇呢,以前没做过这方面的,有知道的告诉我一下哈~
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1楼 2011-05-21 16:53:34
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deblway

铜虫 (初入文坛)
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hanling.20(金币+1): 2011-06-06 08:07:20
有那种类似于提取质粒的柱子，不过要大很多！专门用来手提蛋白的，直接离心去掉酒精！然后用你的结合缓冲液（一般购买填料时均有说明书说明配置方法）加入柱子中重悬你的填料，然后离心去除。。重复几次即可！不用保存的时候也将填料放置在结合缓冲液里。。。乙醇还是比较好去除的。。。一般的水相缓冲液都可以去除。。当然如果用蛋白纯化系统的话，会更简单些。。直接装柱，用结合缓冲液一直冲到电导率稳定了就行了。。。
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2楼2011-06-02 15:44:46
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
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hanling.20(金币+1): 2011-06-06 08:07:27
引用回帖:
Originally posted by deblway at 2011-06-02 15:44:46:
有那种类似于提取质粒的柱子，不过要大很多！专门用来手提蛋白的，直接离心去掉酒精！然后用你的结合缓冲液（一般购买填料时均有说明书说明配置方法）加入柱子中重悬你的填料，然后离心去除。。重复几次即可！不用 ...

20%乙醇是没有电导率的
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3楼2011-06-02 18:44:39
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
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amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-02 20:38:19
hanling.20(金币+1): 2011-06-06 08:09:21
我们是这么做的：

1）胶沉积后，先将上层的溶液吸走，加入buffer,继续沉积，这样可以除去一部分的乙醇。
2）上柱。用buffer一直冲，冲到出来的溶液没有酒精的味道。一般用1到2天冲完就基本没有乙醇了。

另一种方法要取决于粒径大小。用专门的洗胶布用蒸馏水一直冲，冲完上柱，用需要的buffer冲，但是这种方法经常会损失一部分胶。



[ Last edited by zhengfan1109 on 2011-6-2 at 19:21 ]
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4楼2011-06-02 19:19:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
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hanling.20(金币+2): 2011-06-06 08:09:28
amisking(金币+5, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-18 20:45:02
我没有用过这个填料，只用过凝胶过滤柱、离子交换层析柱、疏水层析柱、镍柱，所以以下发言仅供参考。

我做层析的时候最后一步是将层析柱保存在20%乙醇中，下一次再用的时候首先就是用去气的超纯水冲洗层析柱，只要冲洗两个柱床体积就能去掉乙醇了。我觉得填料要用的时候是要装成层析柱的，你为什么要等胶沉下去，与液体分层之后去吸液体呢？胶不重，肯定是有一点被吸上去，会有损失的。而且买来的胶，用来保存的液体不会多的，最多只是超出胶面一点儿。所以我很不建议这样做。

买回来的填料最好别用缓冲液冲洗，第一步应该是去掉乙醇，因为你不知道缓冲液会不会跟乙醇有什么反应，虽说可能性不大，但还是先用去气的超纯水或者双蒸水冲洗起码2个柱床体积，把里面的所有液体置换掉，这才用缓冲液去洗。

另外，我不理解为什么要冲洗1到2天，是这个层析柱体积特别特别大，是工厂里用的，还是流速特别小？如果流速小，那么填料估计已经变形堵塞了，新买的不大可能就挂了吧？

所以我的建议，就是直接装柱，用去气的超纯水或者双蒸水冲洗起码2个柱床体积（可以冲洗多倍体积），把里面的所有液体置换掉，而这个过程应该不久，除非真是填料挂了。
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5楼2011-06-03 00:59:46
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
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刚收到短消息，楼主给了2个金币，就看一下帖。3天过去了，不知道楼主进展如何。
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6楼2011-06-06 15:39:35
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
662106楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-06-03 00:59:46
我没有用过这个填料，只用过凝胶过滤柱、离子交换层析柱、疏水层析柱、镍柱，所以以下发言仅供参考。

我做层析的时候最后一步是将层析柱保存在20%乙醇中，下一次再用的时候首先就是用去气的超纯水冲洗层析柱，只 ...

嗯 嗯 嗯 我就是这样做的 哈哈哈 然后再问你个问题哈 就是多糖液做离子交换的时候 能不能用乙酸铵或者氯化铵做缓冲液的啊？？我用的填料是QFF的(Q sepharose fast flow)，大侠 急助！！！还有就是另外一个问题， 我以前师兄是用PBS去缓冲柱子的，进行柱平衡，但是他后面是用氯化钠进行洗脱的，那这样可以么？？？
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7楼2012-11-02 13:58:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2452993楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-11-02 13:58:30
嗯 嗯 嗯 我就是这样做的 哈哈哈 然后再问你个问题哈 就是多糖液做离子交换的时候 能不能用乙酸铵或者氯化铵做缓冲液的啊？？我用的填料是QFF的(Q sepharose fast flow)，大侠 急助！！！还有就是另外一个问题， 我 ...

不好意思，我没纯化过多糖。
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8楼2012-11-02 14:07:04
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