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如何洗去填料中的乙醇?
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| 买回来的胰蛋白酶-琼脂糖凝胶4B 是保存在20%乙醇里的,如果使用的话要怎么洗去乙醇呢,以前没做过这方面的,有知道的告诉我一下哈~ |
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冼亮淀粉酶
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3楼2011-06-02 18:44:39
2楼2011-06-02 15:44:46
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我们是这么做的： 1）胶沉积后，先将上层的溶液吸走，加入buffer,继续沉积，这样可以除去一部分的乙醇。 2）上柱。用buffer一直冲，冲到出来的溶液没有酒精的味道。一般用1到2天冲完就基本没有乙醇了。 另一种方法要取决于粒径大小。用专门的洗胶布用蒸馏水一直冲，冲完上柱，用需要的buffer冲，但是这种方法经常会损失一部分胶。  [ Last edited by zhengfan1109 on 2011-6-2 at 19:21 ] |
4楼2011-06-02 19:19:09
冼亮淀粉酶
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我没有用过这个填料，只用过凝胶过滤柱、离子交换层析柱、疏水层析柱、镍柱，所以以下发言仅供参考。 我做层析的时候最后一步是将层析柱保存在20%乙醇中，下一次再用的时候首先就是用去气的超纯水冲洗层析柱，只要冲洗两个柱床体积就能去掉乙醇了。我觉得填料要用的时候是要装成层析柱的，你为什么要等胶沉下去，与液体分层之后去吸液体呢？胶不重，肯定是有一点被吸上去，会有损失的。而且买来的胶，用来保存的液体不会多的，最多只是超出胶面一点儿。所以我很不建议这样做。 买回来的填料最好别用缓冲液冲洗，第一步应该是去掉乙醇，因为你不知道缓冲液会不会跟乙醇有什么反应，虽说可能性不大，但还是先用去气的超纯水或者双蒸水冲洗起码2个柱床体积，把里面的所有液体置换掉，这才用缓冲液去洗。 另外，我不理解为什么要冲洗1到2天，是这个层析柱体积特别特别大，是工厂里用的，还是流速特别小？如果流速小，那么填料估计已经变形堵塞了，新买的不大可能就挂了吧？ 所以我的建议，就是直接装柱，用去气的超纯水或者双蒸水冲洗起码2个柱床体积（可以冲洗多倍体积），把里面的所有液体置换掉，而这个过程应该不久，除非真是填料挂了。 |
5楼2011-06-03 00:59:46
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