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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 酶切条带

很奇怪的一件事，酶切完电泳条带与PCR产物对比，多了一条大于PCR产物的条带？？求解~~~
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1楼 2011-05-17 20:47:42
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
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xwsooo(金币+1): 2011-05-17 20:52:55
难道出现酶切产物自连？！
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2楼2011-05-17 20:49:42
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 20:49:42:
难道出现酶切产物自连？！

请赐教？我发现几率大概1/3。。。
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3楼2011-05-17 20:51:08
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 20:49:42:
难道出现酶切产物自连？！

我做了三种PCR产物浓度，发现浓度最大的倒是切出合理的条带数目了（虽然在3%胶上与marker对比，与预计大小有些出入），浓度最小的是smear模糊了，中等浓度的就产生比PCR产物还大几十个bp 的片段，非常的不解~~·
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4楼2011-05-17 21:08:12
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lijunj

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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xwsooo(金币+2): 2011-05-18 08:07:38
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-19 12:44:28
是不是PCR产物序列中含有两个相同的酶切位点？
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5楼2011-05-17 22:58:01
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lijunj at 2011-05-17 22:58:01:
是不是PCR产物序列中含有两个相同的酶切位点？

是的，而且不止两个，除了SNP处的酶切位点之外，分别在在上下游引物结合靶序列处还各有一个相同的酶切位点。。。而我现在的PCR产物已经是290多bp大小了
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6楼2011-05-18 08:07:18
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lijunj at 2011-05-17 22:58:01:
是不是PCR产物序列中含有两个相同的酶切位点？

但是大小怎么就大于PCR产物呢，难道真的是连接上去了么！！！
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7楼2011-05-18 08:09:47
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xwsooo

银虫 (小有名气)
继续顶~~~
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8楼2011-05-19 09:06:15
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beautybanana

木虫 (著名写手)
★
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xwsooo(金币+1): 2011-05-20 08:59:32
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-05-17 20:47:42:
很奇怪的一件事，酶切完电泳条带与PCR产物对比，多了一条大于PCR产物的条带？？求解~~~

可能酶切位点不止一个，仔细核对下酶切位点的专一性~
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9楼2011-05-19 18:11:23
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-05-19 18:11:23:
可能酶切位点不止一个，仔细核对下酶切位点的专一性~

是的，我在上面已经说啦，而且不止两个，除了SNP处的酶切位点之外，分别在在上下游引物结合靶序列处还各有一个相同的酶切位点。。。而我现在的PCR产物已经是290多bp大小了
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10楼2011-05-20 08:59:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
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xwsooo(金币+1): 2011-05-20 14:18:10
难道污染了。。。。
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11楼2011-05-20 09:10:57
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beautybanana

木虫 (著名写手)
★
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xwsooo(金币+1): 2011-05-20 14:18:05
这个大概就要重新换酶切位点了，改用别的单一酶切位点~
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12楼2011-05-20 13:34:27
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-05-20 13:34:27:
这个大概就要重新换酶切位点了，改用别的单一酶切位点~

啊，我酶切的目的是区分基因型，在SNP点能区分两个不同基因型的就是这个酶切位点啊~~~
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13楼2011-05-20 14:17:03
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-20 09:10:57:
难道污染了。。。。

啊，是被CR产物污染？ 不解~~
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14楼2011-05-20 14:17:44
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beautybanana

木虫 (著名写手)
★
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xwsooo(金币+1): 2011-05-20 15:09:00
你把可能的原因一一列出来，然后再针对各种原因加以实验证明，最后才会解决你的问题，这是分析问题与解决问题的过程，建议你自己加以体会，肯定会受益的~
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15楼2011-05-20 15:00:43
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xwsooo

银虫 (小有名气)
哭死~~~~换了对引物，PCR条带也不错，还是产生比PCR产物大100-200bp的三，四条片段啊，这哪里是酶切啊，越切越大，5555~~~·
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17楼2011-05-26 12:48:27
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xwsooo

银虫 (小有名气)
谁也有遇到同样问题的帮帮我啊，心里真是太受打击了
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18楼2011-05-26 12:49:24
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
酶过期了没……
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19楼2011-05-26 14:42:49
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-05-26 14:42:49:
酶过期了没……

刚送来不久啊
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20楼2011-05-26 15:10:20
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xwsooo

银虫 (小有名气)
继续顶，还木有解决问题，单酶切产生比PCR产物还大的片段，切下来的小片段不见了
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21楼2011-06-09 07:54:44
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zhcosa

金虫 (小有名气)
★
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如果实在找不到原因，建议PCR重做，重新纯化、电泳，酶切体系的全部试剂更新。
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22楼2011-06-09 08:54:05
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简单回复
xwsooo16楼
2011-05-20 15:09   回复  
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-05-20 15:00:43: 你把可能的原因一一列出来，然后再针对各种原因加以实验证明，最后才会解决你的问题，这是分析问题与解决问题的过程，建议你自己加以体会，肯定会受益的~

嗯
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