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掌心樱小桃

金虫 (小有名气)

[求助] 测序问题~

求助啊!!!!!!!!!!!
     各位同学,本人做的是土壤16s总DNA的提取,引物用的是通用的357F和518R,PCR后做了DGGE,条带差异性很不错,后来就把DGGE那个胶上的特异性条带切下再次PCR准备测序,刚开始没P出来,后来PCR以后检测有条带,但是不是很亮,就准备拿去测测试试,但是测序公司的人来了以后说测不出序列也要收费,大家测序的都是这样吗?听说是测不出来不收费的呀~还有大家还有没有什么好的方法可以切那个dgge的胶以后PCR回收的亮一点?谢谢大家啦~~~
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生物00

新虫 (初入文坛)

把PCR产物连到菌中,再做菌落PCR,然后再测序,效果会好些
3楼2011-05-17 09:52:44
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生物00

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

掌心樱小桃(金币+1): 谢谢~~~我做的是土壤总DNA提取,请问一下连载体是什么? 2011-05-17 09:46:16
连载体之后PCR再送去测序一般就能测出好的结果了,如果单纯想让PCR亮一些的话可以用试剂盒回收你跑的琼脂糖胶再次PCR就亮了!
2楼2011-05-17 09:43:58
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掌心樱小桃

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by s348337606 at 2011-05-19 22:25:49:
jiang博士加油

孙同学~~~哈哈哈~~~
5楼2011-05-20 15:56:32
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xiangyue2010

金虫 (正式写手)

您好,想问的是你用的引物是带GC夹的吗?这个做PCR好做吗?使用touchdown程序做的吗?一直没P出来,求助!
心情好一切都好
6楼2011-05-25 10:06:19
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