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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 测序问题~
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掌心樱小桃

金虫 (小有名气)

[求助] 测序问题~

求助啊！！！！！！！！！！！
     各位同学，本人做的是土壤16s总DNA的提取，引物用的是通用的357F和518R，PCR后做了DGGE，条带差异性很不错，后来就把DGGE那个胶上的特异性条带切下再次PCR准备测序，刚开始没P出来，后来PCR以后检测有条带，但是不是很亮，就准备拿去测测试试，但是测序公司的人来了以后说测不出序列也要收费，大家测序的都是这样吗？听说是测不出来不收费的呀~还有大家还有没有什么好的方法可以切那个dgge的胶以后PCR回收的亮一点？谢谢大家啦~~~
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王营wy

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1楼2011-05-16 16:09:31
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生物00

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

掌心樱小桃(金币+1): 谢谢~~~我做的是土壤总DNA提取，请问一下连载体是什么？ 2011-05-17 09:46:16
连载体之后PCR再送去测序一般就能测出好的结果了，如果单纯想让PCR亮一些的话可以用试剂盒回收你跑的琼脂糖胶再次PCR就亮了！
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2楼2011-05-17 09:43:58
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生物00

新虫 (初入文坛)
把PCR产物连到菌中，再做菌落PCR，然后再测序，效果会好些
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3楼2011-05-17 09:52:44
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s348337606

金虫 (小有名气)
jiang博士加油
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曾经沧海难为水，除却巫山不是云。取次花丛懒回顾，半缘修道半缘君。
4楼2011-05-19 22:25:49
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掌心樱小桃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by s348337606 at 2011-05-19 22:25:49:
jiang博士加油

孙同学~~~哈哈哈~~~
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5楼2011-05-20 15:56:32
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xiangyue2010

金虫 (正式写手)
您好，想问的是你用的引物是带GC夹的吗？这个做PCR好做吗？使用touchdown程序做的吗？一直没P出来，求助！
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心情好一切都好
6楼2011-05-25 10:06:19
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QQ84508540

捐助贵宾 (小有名气)

强迫症患者
测不出来、套峰……都会收费。
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★★★★★从☆小☆学☆生☆做☆起！★★★★★
7楼2011-05-25 10:09:12
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掌心樱小桃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiangyue2010 at 2011-05-25 10:06:19:
您好，想问的是你用的引物是带GC夹的吗？这个做PCR好做吗？使用touchdown程序做的吗？一直没P出来，求助！

dgge前那次pcr是带GC夹子的，dgge后就是想测序之前的那次pcr千万就不能带GC夹子了，要不肯定就测不出来了。。。
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8楼2011-05-26 09:22:04
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掌心樱小桃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by QQ84508540 at 2011-05-25 10:09:12:
测不出来、套峰……都会收费。

英俊测不出来是不收费的哦~
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9楼2011-05-26 09:22:23
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王营wy

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
请问你测序了吗？我DGGE割胶后PCR结果都很好可是再次DGGE就出现问题了，回收的单一条带再次DGGE胶上都有两条带，能测序吗？盼望你的回复~~
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阳光总在风雨后
10楼2011-06-30 17:58:31
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