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常笑

新虫 (小有名气)

[交流] 关于过柱的两个菜鸟问题

在下是个化学方面的菜鸟,请各为XDJM不吝支招

  第一、我该如何选择填料,目下的实验基本属于天然产物分离,所不同的是产物不是在植物体中,而是在培养的细胞中,一切都是未知的,我们实验室的HPLC上在一定波长下出现了几个峰,于是乎,老板就让我把这几个物质全部分离出来,同志们哪,我该怎么做呢?我想我们感兴趣的大概都是一些极性比较小的物质吧?我是选用粗分效果比较好的树脂呢,还是选用常用的硅胶呢?
  第二 、我做了两天的预实验,用TLC摸洗脱条件,初步打算是用氯仿/醇系统,可是我看书上说淋洗剂用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂,这我就不明白了,比如说我找到一个比较好的条件(氯仿:甲醇=9:1)可是淋洗的时候我该用什么浓度呢?? 怎么个“稀释”法。

   谢谢各位老大  

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laosi509

至尊木虫 (文坛精英)

美特斯邦威:不加寻常班!

填料和溶剂配制都要注意.过柱是慢慢探索的过程,溶剂配比很重要.尤其是后面的物质.
adidas·nothingimpossiblenothingventured,nothinggaided!Itistheleadershipthateachofusmustadoptifwearetolead!
7楼2006-09-26 11:44:32
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yhyh96

木虫 (著名写手)



wsshihan(金币+1):感谢参与!
用硅胶柱,先用TLC看看,选择Rf值0.2 时的展开剂就可以作为洗脱剂开始洗脱
2楼2006-09-25 14:37:49
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yhyh96

木虫 (著名写手)


然后逐渐增加梯度(极性加大)
3楼2006-09-25 14:39:06
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cad_0

木虫 (著名写手)

玛雅城的小石头


wsshihan(金币+1):感谢参与!
你为过柱子老是分离不好发过愁吗?
    我的方法尽管慢了一点,但效果不错!你也试一试!我也来个抛砖引玉,大家都谈一下自己的经验。
     我的经验是把柱子装的很结实,看着透明状。做法如下:
    先把硅胶泡在烧杯中,用待用的洗脱剂泡,用超声波超半个小时,中间看到气泡 时用玻璃棒搅一下,如果不急着用的话还可以再泡一会,看你的时间定!能泡一夜更好,这样的柱子,你不用怎么敲,就相当结实,走柱子时不要加压。
     这样的结果是在Rf值在0.5时都分得开,当然也要看你的洗脱剂的极性,关于极性的问题,别人已经说得很好,我就不多说了。如果你的产物极性相当近,也分离的开,你的是天然产物或者是非常复杂的东西,你就要试一试了!
    主要针对复杂产物!
4楼2006-09-25 14:41:03
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