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常笑

新虫 (小有名气)

[交流] 关于过柱的两个菜鸟问题

在下是个化学方面的菜鸟,请各为XDJM不吝支招

  第一、我该如何选择填料,目下的实验基本属于天然产物分离,所不同的是产物不是在植物体中,而是在培养的细胞中,一切都是未知的,我们实验室的HPLC上在一定波长下出现了几个峰,于是乎,老板就让我把这几个物质全部分离出来,同志们哪,我该怎么做呢?我想我们感兴趣的大概都是一些极性比较小的物质吧?我是选用粗分效果比较好的树脂呢,还是选用常用的硅胶呢?
  第二 、我做了两天的预实验,用TLC摸洗脱条件,初步打算是用氯仿/醇系统,可是我看书上说淋洗剂用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂,这我就不明白了,比如说我找到一个比较好的条件(氯仿:甲醇=9:1)可是淋洗的时候我该用什么浓度呢?? 怎么个“稀释”法。

   谢谢各位老大  
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cad_0

木虫 (著名写手)

玛雅城的小石头

★
wsshihan(金币+1):感谢参与!
你为过柱子老是分离不好发过愁吗?
    我的方法尽管慢了一点,但效果不错!你也试一试!我也来个抛砖引玉,大家都谈一下自己的经验。
     我的经验是把柱子装的很结实,看着透明状。做法如下:
    先把硅胶泡在烧杯中,用待用的洗脱剂泡,用超声波超半个小时,中间看到气泡 时用玻璃棒搅一下,如果不急着用的话还可以再泡一会,看你的时间定!能泡一夜更好,这样的柱子,你不用怎么敲,就相当结实,走柱子时不要加压。
     这样的结果是在Rf值在0.5时都分得开,当然也要看你的洗脱剂的极性,关于极性的问题,别人已经说得很好,我就不多说了。如果你的产物极性相当近,也分离的开,你的是天然产物或者是非常复杂的东西,你就要试一试了!
    主要针对复杂产物!
4楼2006-09-25 14:41:03
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yhyh96

木虫 (著名写手)


★
wsshihan(金币+1):感谢参与!
用硅胶柱,先用TLC看看,选择Rf值0.2 时的展开剂就可以作为洗脱剂开始洗脱
2楼2006-09-25 14:37:49
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yhyh96

木虫 (著名写手)


然后逐渐增加梯度(极性加大)
3楼2006-09-25 14:39:06
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海角

木虫 (正式写手)

★ ★
常笑(金币+1):多谢
wsshihan(金币+1):感谢参与!
一般来说过柱子洗脱剂的极性比TLC展开剂的极性要小,比如你有三种物质要分,当TLC(氯仿/甲醇=9/1)第一个点Rf=0.5或者更小,而其他两个点基本不动时,过柱可能要选(氯仿/甲醇=15/1或者20/1)都行;然后当TLC(氯仿/甲醇=5/1)第二个点Rf=0.5或更小,而第三个点基本不动时,过柱用氯仿/甲醇=10/1可能会好。总的来说如果组分较多点板离得很近,洗脱剂的极性就小一些,梯度洗脱;如果好分用TLC选的展开剂洗脱就行。
5楼2006-09-25 19:34:02
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