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2585165

金虫 (正式写手)

[交流] 毕赤酵母转化表达 已有7人参与

周围做毕赤酵母的人不是很多,所以积攒了挺多问题的,希望大家能帮帮忙。
  1,毕赤酵母转化后在MD板子上,长几天后竟然变色了,差不多算是红色吧,是不是死掉了呢?
  2,同样的条件,除了质粒不相同外,上周转化的效果很好,而这周就只有小小的菌苔,长着长着也都死掉了。纠结中。
  3,关于毕赤酵母感受态的制作,1M DTT大家是用水还是缓冲液配制的?而两种不同的配制方法,对于感受态的转化效率是否有影响?
  现就这么多问题,希望大家能帮忙看看。
  大家有什么问题也都可以提一下,要是能帮上的一定竭尽全力。
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哎呀呀,别老说我丑,比起小时候,我这还真算是漂亮了!
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兔兔yy070330

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wanhscn(金币+3): 鼓励新虫参与交流! 2011-09-05 22:13:46
引用回帖:
1楼: Originally posted by 2585165 at 2011-05-12 10:09:31:
周围做毕赤酵母的人不是很多,所以积攒了挺多问题的,希望大家能帮帮忙。
  1,毕赤酵母转化后在MD板子上,长几天后竟然变色了,差不多算是红色吧,是不是死掉了呢?
  2,同样的条件,除了质粒不相同外,上周转 ...

我做电转后也出现过红色的菌落,这个应该是染菌没错啦。至于感受态的制作,我是电转的,用YPD摇菌至OD600=1.3-1.5,然后离心,用预冷的无菌水重悬菌体(2次),离心然后拿1M的预冷山梨醇洗一次,最后用1Ml山梨醇重悬,分装后就可以用了。另外,有YNB何葡萄糖的培养基要用115度灭菌20Min,不用单独配。
11楼2011-09-05 21:44:11
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liby

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
红色的是染菌了。主要是试剂,如:山梨醇。
2楼2011-05-12 12:56:16
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roomofxw

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-05-12 18:57:55
有一种红酵母,是红色的。
用过GS115印象是白色的,所以可能是染菌了。
做的电转,感受态用山梨醇洗的,印象中没用DTT,反正也转出来了。
3楼2011-05-12 13:01:42
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2585165

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by liby at 2011-05-12 12:56:16:
红色的是染菌了。主要是试剂,如:山梨醇。

感受态是同一批的,整板子都是先是白色,长一长就不长了,然后变色了,估计是挂了。
哎呀呀,别老说我丑,比起小时候,我这还真算是漂亮了!
4楼2011-05-12 13:45:21
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