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2585165

金虫 (正式写手)

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[交流] 毕赤酵母转化表达已有7人参与

周围做毕赤酵母的人不是很多，所以积攒了挺多问题的，希望大家能帮帮忙。
  1，毕赤酵母转化后在MD板子上，长几天后竟然变色了，差不多算是红色吧，是不是死掉了呢？
  2，同样的条件，除了质粒不相同外，上周转化的效果很好，而这周就只有小小的菌苔，长着长着也都死掉了。纠结中。
  3，关于毕赤酵母感受态的制作，1M DTT大家是用水还是缓冲液配制的？而两种不同的配制方法，对于感受态的转化效率是否有影响？
  现就这么多问题，希望大家能帮忙看看。
  大家有什么问题也都可以提一下，要是能帮上的一定竭尽全力。

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哎呀呀，别老说我丑，比起小时候，我这还真算是漂亮了！

1楼 2011-05-12 10:09:31

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兔兔yy070330

铜虫 (初入文坛)

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wanhscn(金币+3): 鼓励新虫参与交流！ 2011-09-05 22:13:46

引用回帖:

1楼: Originally posted by 2585165 at 2011-05-12 10:09:31:
周围做毕赤酵母的人不是很多，所以积攒了挺多问题的，希望大家能帮帮忙。
1，毕赤酵母转化后在MD板子上，长几天后竟然变色了，差不多算是红色吧，是不是死掉了呢？
2，同样的条件，除了质粒不相同外，上周转 ...

我做电转后也出现过红色的菌落，这个应该是染菌没错啦。至于感受态的制作，我是电转的，用YPD摇菌至OD600=1.3-1.5，然后离心，用预冷的无菌水重悬菌体（2次），离心然后拿1M的预冷山梨醇洗一次，最后用1Ml山梨醇重悬，分装后就可以用了。另外，有YNB何葡萄糖的培养基要用115度灭菌20Min,不用单独配。