Originally posted by syn1985 at 2011-05-11 21:03:16:
我也是用沸水裂解了啊 呵呵

Originally posted by syn1985 at 2011-05-11 18:37:29:
我用的是rtaq 所以可以直接做TA的，平板上长出来的克隆很多，可是随机挑取5个都是假阳性的 而且这5个还是靠近蓝斑旁边挑的， 我不太懂你为啥说克隆多就表明连接反应没问题啊 我觉得连接反应是没问题 但是全是T ...

Originally posted by szylnl at 2011-05-11 22:41:17:
前面都差不多，我做菌落PCR是先把引物和mix加好，然后用牙签挑一下单菌落，放在PCR管里搅一下，然后在PCR仪上设计一个95℃，10分钟的程序，之后再加上Taq酶，不知道你这样做会怎样。

Originally posted by glucidum at 2011-05-12 06:23:25:
TA连接会有自连现象，有自连就说明酶什么的都是正常的，否则自连也无法发生的。
还有两个问题或许你也要注意一下:
(1)你的PCR特异性好不好,纯化后有没有小片段产物?如果有的话也会发生插入，而且理论上将小片 ...

Originally posted by sfb1020 at 2011-05-12 09:40:29:
应该是pcr不好P，你可以粗提质粒跑个电泳看看，和阴性对照对比一下。
一般16度过夜肯定能连上，很好连的。