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yuxia82012

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证实片段没问题了，最多连一个小时就好了

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在等待中涅槃重生

21楼2011-05-16 13:45:19

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syn1985

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谢谢各位的热心原因找到了是我的通用引物出了问题我需要去面壁竟然连引物二聚体和条带都分不清楚

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22楼2011-05-20 13:33:04

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振子

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200bp，你这个体系连的话最多两三个小时就可以了，是不是连的太久载体自连了都

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23楼2012-05-24 16:03:27

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振子

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986201楼: Originally posted by syn1985 at 2011-05-12 09:09:51:
我以前也这么做过不过那是菌斑比较大的情况下要不然的话就挑没了

可以先用单斑划线然后挑一半菌扩PCR，另一半可以继续用来划单斑

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24楼2012-05-24 16:08:12

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振子

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1342970楼: Originally posted by syn1985 at 2011-05-20 13:33:04:
谢谢各位的热心原因找到了是我的通用引物出了问题我需要去面壁竟然连引物二聚体和条带都分不清楚

想问下引物出了什么问题，因为我的也是连不上，筛阳性也都是空载体酶什么的都没问题，和别人一块做的，别人的出来了我的就不行，郁闷好长时间了，一直在找原因，谢谢！

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25楼2012-05-24 16:12:20

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syn1985

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1560992楼: Originally posted by 振子 at 2012-05-24 16:12:20:
想问下引物出了什么问题，因为我的也是连不上，筛阳性也都是空载体酶什么的都没问题，和别人一块做的，别人的出来了我的就不行，郁闷好长时间了，一直在找原因，谢谢！

我是在宝生物他们家买原装的M13引物扩不出来换成自己合成或者原先扩基因的引物就没问题我那个不是连不上只是检测出了问题你这个如果检测没问题的话那应该是你目的基因浓度不够加大浓度吧既然人家做出来了应该不是检测手段和连接酶的问题了

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26楼2012-05-24 19:33:25

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xjtu0025

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T载体真的会自连么..到哪加两个A呀......

对照很好做啊..你每次换一个东西..阳性对照,阴性对照都要做好...这是基本习惯啊..不然出问题哭都不知道..也浪费时间..

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27楼2013-05-20 08:59:23

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syn1985

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27楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-05-20 08:59:23
T载体真的会自连么..到哪加两个A呀......

对照很好做啊..你每次换一个东西..阳性对照,阴性对照都要做好...这是基本习惯啊..不然出问题哭都不知道..也浪费时间..

新手吧 T载体自连的现象不要太普遍还有一般做T载体连接不需要做对照浪费试剂和精力写文章也用不上

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28楼2013-05-20 12:35:04

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