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dxpwww654

木虫 (小有名气)

[求助] MDA-MB-231细胞培养

小弟最近刚接触细胞培养,实验室要养MDA-MB-231和MDA-MB-435,看文献上及ATCC上都用L15培养基,还要加谷氨酰胺和胰岛素。实验中都加了,但细胞状态就是不好,感觉破破烂烂的,不知各位大虾有没有这方面的经验啊,L15培养基是不是还得加HEPES起缓冲作用啊?
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dxpwww654

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-11 08:34:07:
你测量过配好了以后的细胞培养液的PH还有渗透压什么的吗?

培养基配好后pH值约为7.8,后用HCl调到了7.6(培养基配置上说要用NaOH或HCl调到7.6),没测渗透压,渗透压会有很大影响吗?培养基配置说明上都没有说明要调渗透压
3楼2011-05-11 08:44:27
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

你测量过配好了以后的细胞培养液的PH还有渗透压什么的吗?
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2011-05-11 08:34:07
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 辛苦了 2011-05-11 18:41:55
silicare(金币+3): 2011-05-12 12:00:59
引用回帖:
Originally posted by dxpwww654 at 2011-05-11 08:44:27:
培养基配好后pH值约为7.8,后用HCl调到了7.6(培养基配置上说要用NaOH或HCl调到7.6),没测渗透压,渗透压会有很大影响吗?培养基配置说明上都没有说明要调渗透压

看来PH应该问题不大
渗透压要是按protocol配置的话也问题不太
现在唯一的要考虑的问题是:你在你的的培养液后来加入了几种因子,这几种因子在L15中原来有吗,文献给你的参考终浓度是多少?你是需要直接添加文献给你的量、还是需要添加文献给你的量减去L15中原来含有的量从而得到的差量?
你的细胞给你之前原来形态是很好的吗?
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
4楼2011-05-11 08:56:15
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dxpwww654

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-11 08:56:15:
看来PH应该问题不大
渗透压要是按protocol配置的话也问题不太
现在唯一的要考虑的问题是:你在你的的培养液后来加入了几种因子,这几种因子在L15中原来有吗,文献给你的参考终浓度是多少?你是需要直接添加文 ...

对于231细胞,加入15%FBS,0.2922g/L的谷氨酰胺,再加入抗生素,这是给我细胞的人给我的配置方法,他的细胞就养的很好。对于435细胞,加入10%FBS,0.01g/L谷氨酰胺,0.01g/L牛胰岛素,再加抗生素,这是ATCC上给的配置方法。有点怀疑是谷氨酰胺降解为谷氨酸,导致pH变化,而培养基中也没有起缓冲作用的成分。
5楼2011-05-12 08:54:59
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