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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MDA-MB-231细胞培养
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dxpwww654

木虫 (小有名气)

[求助] MDA-MB-231细胞培养

小弟最近刚接触细胞培养，实验室要养MDA-MB-231和MDA-MB-435，看文献上及ATCC上都用L15培养基，还要加谷氨酰胺和胰岛素。实验中都加了，但细胞状态就是不好，感觉破破烂烂的，不知各位大虾有没有这方面的经验啊，L15培养基是不是还得加HEPES起缓冲作用啊？
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1楼 2011-05-10 21:38:57
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

你测量过配好了以后的细胞培养液的PH还有渗透压什么的吗？
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
2楼2011-05-11 08:34:07
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dxpwww654

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-11 08:34:07:
你测量过配好了以后的细胞培养液的PH还有渗透压什么的吗？

培养基配好后pH值约为7.8，后用HCl调到了7.6（培养基配置上说要用NaOH或HCl调到7.6），没测渗透压，渗透压会有很大影响吗？培养基配置说明上都没有说明要调渗透压
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3楼2011-05-11 08:44:27
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 辛苦了 2011-05-11 18:41:55
silicare(金币+3): 2011-05-12 12:00:59
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Originally posted by dxpwww654 at 2011-05-11 08:44:27:
培养基配好后pH值约为7.8，后用HCl调到了7.6（培养基配置上说要用NaOH或HCl调到7.6），没测渗透压，渗透压会有很大影响吗？培养基配置说明上都没有说明要调渗透压

看来PH应该问题不大
渗透压要是按protocol配置的话也问题不太
现在唯一的要考虑的问题是：你在你的的培养液后来加入了几种因子，这几种因子在L15中原来有吗，文献给你的参考终浓度是多少？你是需要直接添加文献给你的量、还是需要添加文献给你的量减去L15中原来含有的量从而得到的差量？
你的细胞给你之前原来形态是很好的吗？
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4楼2011-05-11 08:56:15
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dxpwww654

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-11 08:56:15:
看来PH应该问题不大
渗透压要是按protocol配置的话也问题不太
现在唯一的要考虑的问题是：你在你的的培养液后来加入了几种因子，这几种因子在L15中原来有吗，文献给你的参考终浓度是多少？你是需要直接添加文 ...

对于231细胞，加入15%FBS，0.2922g/L的谷氨酰胺，再加入抗生素，这是给我细胞的人给我的配置方法，他的细胞就养的很好。对于435细胞，加入10%FBS，0.01g/L谷氨酰胺，0.01g/L牛胰岛素，再加抗生素，这是ATCC上给的配置方法。有点怀疑是谷氨酰胺降解为谷氨酸，导致pH变化，而培养基中也没有起缓冲作用的成分。
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5楼2011-05-12 08:54:59
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

dxpwww654(金币+20): 谢谢 2011-05-12 09:39:51
引用回帖:
Originally posted by dxpwww654 at 2011-05-12 08:54:59:
对于231细胞，加入15%FBS，0.2922g/L的谷氨酰胺，再加入抗生素，这是给我细胞的人给我的配置方法，他的细胞就养的很好。对于435细胞，加入10%FBS，0.01g/L谷氨酰胺，0.01g/L牛胰岛素，再加抗生素，这是ATCC上给 ...

没用过L15
难道培养基中没有缓冲体系吗
这个估计就有点大条了
不过他能养得好
为什么咱们养不好那
还是请教一下他把
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
6楼2011-05-12 09:20:02
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dxpwww654

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-12 09:20:02:
没用过L15
难道培养基中没有缓冲体系吗
这个估计就有点大条了
不过他能养得好
为什么咱们养不好那
还是请教一下他把

一般的培养基，如1640、DMEM不都得加碳酸氢钠起缓冲作用嘛，但L15是空气中培养使用的，不能用碳酸氢钠作缓冲介质。看有的介绍是L15中含大量氨基酸，从而起缓冲作用，不知真假。我还是再和同学探讨一下吧。谢谢你的耐心解答
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7楼2011-05-12 09:39:30
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
引用回帖:
Originally posted by dxpwww654 at 2011-05-12 09:39:30:
一般的培养基，如1640、DMEM不都得加碳酸氢钠起缓冲作用嘛，但L15是空气中培养使用的，不能用碳酸氢钠作缓冲介质。看有的介绍是L15中含大量氨基酸，从而起缓冲作用，不知真假。我还是再和同学探讨一下吧。谢谢 ...

不客气
大家共同讨论，共同提高
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8楼2011-05-12 19:34:55
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