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zhanggxfly

金虫 (小有名气)

[求助] 海马细胞培养中,B27和谷氨酰胺的量必须十分精确吗?

我是新手,培养仔鼠神经细胞。用到的Neur Basal培养基中需要加入B27,本来是50mlNB,加入1ml B27的,可是我在分装10ml的B27时,却分成了11管,怎么办啊?怎么用啊?会影响细胞的生长吗?把B27全都扔了是不现实的,毕竟B27太贵了啊。

还有,在加入谷氨酰胺时,没有注意谷氨酰胺已经有沉淀了,仍然是吸了原来的清夜加入到NB培养基中,这样配出来的培养基还能用吗?

恳请解答!
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zhanggxfly

金虫 (小有名气)

我买的是500ml装的Neur basal培养基,每次使用前倒出50ml入玻璃瓶 ,加入B27 1ml,再加入谷氨酰胺200ul,就配成可以直接使用的培养基了。
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2楼2011-05-06 10:02:18
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weizhongya

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

zhanggxfly(金币+2): 谢谢回帖 2011-05-06 11:58:01
引用回帖:
Originally posted by zhanggxfly at 2011-05-06 09:32:11:
我是新手,培养仔鼠神经细胞。用到的Neur Basal培养基中需要加入B27,本来是50mlNB,加入1ml B27的,可是我在分装10ml的B27时,却分成了11管,怎么办啊?怎么用啊?会影响细胞的生长吗?把B27全都扔了是不现实的, ...

呵呵 分装多了 一般是你分的有问题啊 一般会有总液体少些 分的过程会有损耗,回头看看是不是枪的问题 分好的每管是不是不足1ml  如果这样 你就好好吸入1ml  至于谷氨酰胺 最好每次最好少配点 每次用之前 必须等化开后 完全溶解 你可以试试看 用别人没有问题的 做个对照
3楼2011-05-06 11:20:06
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zhanggxfly

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by weizhongya at 2011-05-06 11:20:06:
呵呵 分装多了 一般是你分的有问题啊 一般会有总液体少些 分的过程会有损耗,回头看看是不是枪的问题 分好的每管是不是不足1ml  如果这样 你就好好吸入1ml  至于谷氨酰胺 最好每次最好少配点 每次用之前 必须等 ...

我试过了,的确是不足1ml了,可是都分装完了才发现自己的失误,B27不能反复冻融的啊,我这样使用不足1ml的B27,会影响细胞生长吗?
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4楼2011-05-06 12:03:27
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weizhongya

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by zhanggxfly at 2011-05-06 12:03:27:
我试过了,的确是不足1ml了,可是都分装完了才发现自己的失误,B27不能反复冻融的啊,我这样使用不足1ml的B27,会影响细胞生长吗?

拿出来后 就不要再冻了 放在四度 尽快用完 一般不要超过两周 应该没问题的
5楼2011-05-06 12:42:43
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 辛苦~~ 2011-05-06 18:18:46
zhanggxfly(金币+3): 很有帮助~~非常感谢 2011-05-07 19:38:41
引用回帖:
Originally posted by zhanggxfly at 2011-05-06 09:32:11:
我是新手,培养仔鼠神经细胞。用到的Neur Basal培养基中需要加入B27,本来是50mlNB,加入1ml B27的,可是我在分装10ml的B27时,却分成了11管,怎么办啊?怎么用啊?会影响细胞的生长吗?把B27全都扔了是不现实的, ...

1.分装的时候多出来是很正常的
  考虑到连续取样的时候多多少少会有点误差的;
2.你可以第一次解冻两管,然后去1ml,余下的先放4度,下次换液的时候就解冻一管B27,先紧着开始解冻的那关用完,在补足1ML,一次类推就可以了;
3.谷氨酰胺的量是要尽量精确的,因为涉及细胞摄取的问题了,但是啦
要是不是特别精确的话,细胞也一样生存,就是可能需要换液要更频繁点就可以的啦
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
6楼2011-05-06 15:20:21
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