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zhjzhou

木虫 (著名写手)


[交流] 大家来讨论下你们如何做定量的

我咱们这里有很多做定量的牛人,大家来讨论下如何做定量的,我先说一下自己是如何做的。
我提取RNA用TRIZOL,然后将RNA定量用Promega的反转录酶翻转。翻转后的cDNA直接稀4倍,作为模板上定量。这样跑出的内参基因的Ct值应该一样的吧?我听说有不测浓度直接翻转上定量的,这样跑出内参基因Ct相差很多,那这样的内参基因还有意义吗?内参不是看家基因,无论处理还是对照都应该不变化的啊,希望牛人来指点。
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zhjzhou

木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 11:07:09:
不是的,因为样品本身和处理时的差异导致抽提的浓度不同,还有不同批次扩增效率不同,结果当然不用会一样

那你反转录或定量上样的时候模板定量吗?
3楼2011-05-05 12:10:34
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475502411

铜虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
zhjzhou(金币+1):谢谢参与
zhjzhou(金币+1): 2011-05-05 12:10:00
西瓜(金币+3): 赞成~ 2011-05-05 12:41:33
不是的,因为样品本身和处理时的差异导致抽提的浓度不同,还有不同批次扩增效率不同,结果当然不用会一样
2楼2011-05-05 11:07:09
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475502411

铜虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by zhjzhou at 2011-05-05 12:10:34:
那你反转录或定量上样的时候模板定量吗?

不定量
4楼2011-05-05 14:15:44
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