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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家来讨论下你们如何做定量的
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zhjzhou

木虫 (著名写手)

[交流] 大家来讨论下你们如何做定量的

我咱们这里有很多做定量的牛人，大家来讨论下如何做定量的，我先说一下自己是如何做的。
我提取RNA用TRIZOL，然后将RNA定量用Promega的反转录酶翻转。翻转后的cDNA直接稀4倍，作为模板上定量。这样跑出的内参基因的Ct值应该一样的吧？我听说有不测浓度直接翻转上定量的，这样跑出内参基因Ct相差很多，那这样的内参基因还有意义吗？内参不是看家基因，无论处理还是对照都应该不变化的啊，希望牛人来指点。
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1楼 2011-05-05 10:26:15
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zhjzhou

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 11:07:09:
不是的，因为样品本身和处理时的差异导致抽提的浓度不同，还有不同批次扩增效率不同，结果当然不用会一样

那你反转录或定量上样的时候模板定量吗？
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3楼2011-05-05 12:10:34
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475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
zhjzhou(金币+1):谢谢参与
zhjzhou(金币+1): 2011-05-05 12:10:00
西瓜(金币+3): 赞成~ 2011-05-05 12:41:33
不是的，因为样品本身和处理时的差异导致抽提的浓度不同，还有不同批次扩增效率不同，结果当然不用会一样
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-05-05 11:07:09
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zhjzhou at 2011-05-05 12:10:34:
那你反转录或定量上样的时候模板定量吗？

不定量
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4楼2011-05-05 14:15:44
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