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xiajing_acm

新虫 (小有名气)

[求助] western抗体稀释、孵育的时间与条件的疑惑与不解

各位大侠:

        你们好!请问做western时抗体一般用什么稀释好,TBST还是封闭液啊?加入一抗后是4°C孵育过夜好呢还是室温下2h好呢?若是4°孵育过夜需要在把摇床上放到冰箱/柜里震荡过夜吗?可是冰箱/冰柜有插座可以提供摇床的电源吗?

        还有二抗呢?室温一般孵育多久呢?谢谢啦!小弟新手兼菜鸟,恳请大侠们多多指点!
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betty4904589

新虫 (初入文坛)

11楼2015-01-21 21:39:59
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查看全部 11 个回答

simplelcc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


jiangchunyong(金币+1): 谢谢! 2011-05-05 12:40:54
xiajing_acm(金币+2): 2011-05-05 19:49:39
xiajing_acm(金币+1): 谢谢 2011-07-05 16:44:36
我一般用TBST稀释抗体,一抗冰箱孵育过夜;二抗室温2h;我是倒扣着孵,所以都不摇。
2楼2011-05-05 12:34:01
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snailtt

捐助贵宾 (小有名气)

师兄确实在冰箱摇过夜的,还专为此买了个小摇床和两孔的劣质插座,为了线够细能关上门。我自己也是小菜鸟,还在养细胞~
3楼2011-05-05 19:58:39
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wenzhiren

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xiajing_acm(金币+3): 2011-05-07 20:51:39
引用回帖:
Originally posted by xiajing_acm at 2011-05-03 21:47:41:
各位大侠:

        你们好!请问做western时抗体一般用什么稀释好,TBST还是封闭液啊?加入一抗后是4°C孵育过夜好呢还是室温下2h好呢?若是4°孵育过夜需要在把摇床上放到冰箱/柜里震荡过夜吗?可是冰箱/冰柜 ...

1、一抗用缓冲液稀释即可。
2、孵育时间根据实验结果来摸索。
3、若4°过夜,条件容许的话,最好使用摇床。没有条件在冰箱里放摇床,那就直接放4°过夜好了,第二天摇床上多洗几次。摇床可以放到恒温层析柜里面。
4楼2011-05-06 17:28:30
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