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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于westen-blot实验的具体步骤及实验中注意的问题，请教！
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nick.nye-0313

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于westen-blot实验的具体步骤及实验中注意的问题，请教！

最近在做westen，在做的过程中有些问题。比如转膜时间多长为好，1个小时？不同的蛋白通路有区别吗？还有曝光片子的时候，多久为好？有详细的规定吗？还有就是你们大家做完实验后的这些胶，显影定影液失效后最后都是如何处理的？定影液里有没有致癌的物质？做实验的时候应当注意些什么事情？小弟初接触这方面实验，希望有做过的同仁指点指点，十分感谢！
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1楼 2011-05-01 20:55:25
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食品科学2012

铜虫 (小有名气)
1.转膜时间要看你目的蛋白的大小而定，蛋白分子量越大，转膜的电压电流要更大，时间也要更长些，所以没有定值。这个自己看着办
2、曝光时间说不准，如果你的抗体特异性极强，并且你的蛋白丰度极高
3.显影定影液都集中起来，一起处理，我们实验室都是重复使用的
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6楼2012-11-29 11:55:57
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 鼓励交流 2011-05-02 00:33:55
nick.nye-0313(金币+20): 2011-05-26 08:55:30
1.转膜时间要看你目的蛋白的大小而定，蛋白分子量越大，转膜的电压电流要更大，时间也要更长些，所以没有定值。
2.不明白你说的蛋白通路是什么意思，按我的理解，只要你通路上的蛋白有变化，并且足够显著的话，在westen-blot中是可以显示出区别的。
3.曝光时间没有一个定值，如果你的抗体特异性极强，并且你的蛋白丰度极高，比如actin一般我曝光10秒钟就足够了，如果你的单摆风度低的话就要适当延长曝光时间。
4.我这的胶，以及显影定影液都集中起来，一起处理。
5.致不致癌我不敢确定的回答，但是肯定对身体不好，需要戴手套。
6.westen-blot需要注意的事情很多，包括跑SDS-PAGE，转膜，孵育，洗涤等等，建议在论坛里找一下以前发过的流程和注意事项。
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2楼2011-05-01 22:54:42
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
dhd997(金币+2): 赶快去领奖，嘿嘿 2011-05-02 11:02:09
引用回帖:
Originally posted by nick.nye-0313 at 2011-05-01 20:55:25:
最近在做westen，在做的过程中有些问题。比如转膜时间多长为好，1个小时？不同的蛋白通路有区别吗？还有曝光片子的时候，多久为好？有详细的规定吗？还有就是你们大家做完实验后的这些胶，显影定影液失效后最后都 ...

呵呵，好多问题呢。最好自己找个教材详细看看，把一些基本的先熟悉了。这样提问就更有重点啦。
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3楼2011-05-02 00:35:32
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
1. 你是半干转还是湿转？
2. 我们是用PVDF膜直接曝光的，不用胶片....所以这个问题帮不了你....
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生活是美好的
4楼2011-05-03 16:08:36
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