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nick.nye-0313铜虫 (小有名气)
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[求助]
关于westen-blot实验的具体步骤及实验中注意的问题，请教！
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| 最近在做westen，在做的过程中有些问题。比如转膜时间多长为好，1个小时？不同的蛋白通路有区别吗？还有曝光片子的时候，多久为好？有详细的规定吗？还有就是你们大家做完实验后的这些胶，显影定影液失效后最后都是如何处理的？定影液里有没有致癌的物质？做实验的时候应当注意些什么事情？小弟初接触这方面实验，希望有做过的同仁指点指点，十分感谢！ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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nick.nye-0313
铜虫 (小有名气)
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5楼2011-05-07 10:52:19
elvias
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+5, EPI+1): 鼓励交流 2011-05-02 00:33:55
nick.nye-0313(金币+20): 2011-05-26 08:55:30
西瓜(金币+5, EPI+1): 鼓励交流 2011-05-02 00:33:55
nick.nye-0313(金币+20): 2011-05-26 08:55:30
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1.转膜时间要看你目的蛋白的大小而定，蛋白分子量越大，转膜的电压电流要更大，时间也要更长些，所以没有定值。 2.不明白你说的蛋白通路是什么意思，按我的理解，只要你通路上的蛋白有变化，并且足够显著的话，在westen-blot中是可以显示出区别的。 3.曝光时间没有一个定值，如果你的抗体特异性极强，并且你的蛋白丰度极高，比如actin一般我曝光10秒钟就足够了，如果你的单摆风度低的话就要适当延长曝光时间。 4.我这的胶，以及显影定影液都集中起来，一起处理。 5.致不致癌我不敢确定的回答，但是肯定对身体不好，需要戴手套。 6.westen-blot需要注意的事情很多，包括跑SDS-PAGE，转膜，孵育，洗涤等等，建议在论坛里找一下以前发过的流程和注意事项。 |
2楼2011-05-01 22:54:42
西瓜
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3楼2011-05-02 00:35:32
nuoyaeva
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4楼2011-05-03 16:08:36
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