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lucky20511

木虫 (小有名气)

[求助] 关于作液相标准曲线的若干问题

我是新手,从来没做过液相的标准曲线,现在想用外标法做儿茶素的标准曲线,想请教一下各位大侠下面这些问题:
1、标准曲线要取5个点?如何取?(在木虫搜过有人说范围一般要求3个数量级,其中最高和最低浓度要包括所测样品浓度80%和120%,是这样吗?)
2、各浓度的标样的混合标样和单标要进几针?取平均值?
3、一般隔多久要重新做标准曲线?
4、看过一些文献,很多人做液相的标准曲线还会做精密度、稳定性、重复性,加样回收率试验,这些实验一定要做吗?
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cuizy2007

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lucky20511(金币+6): 谢谢你的回复,今天问了一个做液相的老师,她说的跟你说的差不多,非常感谢! 2011-04-28 11:23:03
1、可以按照这个规则来做标准曲线;
2、在仪器稳定的前提下,躲进几次样取平均值当然最好,不过一般3-5次足矣,如果有明显的异常值一定要去除;
3、每次试验的时候可以选取工作曲线某个点(最好中间浓度)重新进样,其仪器响应如果无明显变化则不用重新做,否则需要重新做;
4、一定要做,这些参数是方法可靠性的保证,只有这些参数满意你的数据才可信。
2楼2011-04-28 09:31:35
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yinjiq

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

lucky20511(金币+4): 谢谢你分享的经验!我也要查查资料看具体怎么做精密度、稳定性、重复性,加样回收率试验了~ 2011-04-28 22:33:10
1 回收率是确定方法准确度的,在样品中加标,测定回收率在90%~110%即可,定量分析要求给出
2 精密度表示多次测量的符合程度,标准偏差或相对标准偏差表示。每点3~5次,大偏差数据可删除
3 最好凑齐样品,制作标准曲线,在相同测试条件下测定。如果隔天测试,需选择1~2个点测定,与标准曲线比对,无明显差异,可使用。差差异明显,需重做标准曲线。
4 外标法进样量,要严格控制。
3楼2011-04-28 10:15:46
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lucky20511

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yinjiq at 2011-04-28 10:15:46:
1 回收率是确定方法准确度的,在样品中加标,测定回收率在90%~110%即可,定量分析要求给出
2 精密度表示多次测量的符合程度,标准偏差或相对标准偏差表示。每点3~5次,大偏差数据可删除
3 最好凑齐样品,制作标 ...

外标法进样量要严格控制,我们是手动进样的,每次进样50uL,每次进样前我都小心地把进样针活塞拉杆推到50uL刻度,不知这算不算严格呢?
4楼2011-04-28 22:27:51
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lucky20511

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by cuizy2007 at 2011-04-28 09:31:35:
1、可以按照这个规则来做标准曲线;
2、在仪器稳定的前提下,躲进几次样取平均值当然最好,不过一般3-5次足矣,如果有明显的异常值一定要去除;
3、每次试验的时候可以选取工作曲线某个点(最好中间浓度)重新进 ...

“3、每次试验的时候可以选取工作曲线某个点(最好中间浓度)重新进样,其仪器响应如果无明显变化则不用重新做,否则需要重新做”
这位大侠,请问“仪器响应如果无明显变化”具体指的是什么呢?出峰时间?峰面积?
5楼2011-04-28 22:30:23
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cuizy2007

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lucky20511(金币+3): 谢谢你再次详细的回答!进样环就是定量环吧,我们的是20uL的~ 2011-04-30 10:40:22
回答一下楼主上述两个问题:
手动进样精确控制最好是用进样环,比如你们进样量是50,那就选取50 uL的进样环,进样针取样略多于50即可,进样环可以自动将多余溶液切换至废液。如果没有进样环,采用进样针控制进样量也是可以的,只是注意抽拉进样针的时候不要有气泡;

“仪器响应如果无明显变化”包括出峰时间和峰面积,都不能有明显变化,出峰时间一般用于定性,而峰面积用于定量。

还有另外一点儿建议,就是最好找熟悉实验流程的师兄师姐带你做一遍,你就很快可以上手,自己摸索的话会花相对比较长的时间,而且有些概念(回收率、稳定性、精密度等)对于实际样品分析有一些复杂的细节问题容易搞混,当然只是做一个仪器方法,进标准的话还是比较容易理解的,呵呵!
6楼2011-04-29 12:27:10
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方园园1207

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cuizy2007 at 2011-04-29 12:27:10
回答一下楼主上述两个问题:
手动进样精确控制最好是用进样环,比如你们进样量是50,那就选取50 uL的进样环,进样针取样略多于50即可,进样环可以自动将多余溶液切换至废液。如果没有进样环,采用进样针控制进样量 ...

请问 标准曲线取点的时候 应该遵循什么规则呢?是不是应该使待测的落在曲线中间? 然后取的点是奇数个还是偶数个好? 应该成一定等差比较好吗
7楼2014-04-23 16:19:04
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hesaifei

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 方园园1207 at 2014-04-23 16:19:04
请问 标准曲线取点的时候 应该遵循什么规则呢?是不是应该使待测的落在曲线中间? 然后取的点是奇数个还是偶数个好? 应该成一定等差比较好吗...

您好,能请教您一些液相做标准曲线的问题吗
day day up
8楼2014-08-27 10:09:48
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