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megalt

金虫 (初入文坛)

[求助] DEAE分离多糖时Nacl梯度洗脱的浓度如何确定

DEAE分离多糖时Nacl梯度洗脱的浓度如何确定
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1楼 2011-04-25 21:37:33
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maobohe

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-09 13:26:39
megalt(金币+20): 2011-05-12 22:08:51
NaCl先从比较稀的浓度开始，比如0.05M、0.1M，慢慢提高NaCl的浓度，同时测定洗脱液中有无多糖析出，然后在有洗出峰处的NaCl浓度周围确定
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2楼2011-05-09 11:12:16
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-09 21:56:38
rainwander(EPI+1): 2011-05-09 21:56:43
上样Buffer                 走完继续1柱体积
洗脱buffer + 100 mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 200 mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 500 mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 1000 mM  NaCl    5个柱体积

基本上全部走完，可以摸清出NaCl的大体范围。

继续深化，例如很可能在200~500 mM之间：
洗脱buffer + 200mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 300 mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 400mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 500 mM  NaCl    5个柱体积

这样一天之内，你就可以完成任务了。
在小试阶段，最好凝胶用1-5mL小体积，否则过柱很花时间。
NaCl可配置母液，然后调到buffer所用pH。
赞一下(3人) 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2011-05-09 18:59:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-09 21:57:00
有没有AKTA纯化仪？那样就可以用连续线性梯度洗脱，根本不用摸索什么梯度。如果没有，就只能用不连续线性梯度了，只能自己摸索梯度。其实也不要紧，就是个预备试验，多摸索几个梯度就出来了。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-05-09 21:15:38
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hongyestn

木虫 (正式写手)
跑个梯度洗脱就大概知道多少浓度下就洗脱下来了
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5楼2012-04-12 14:24:47
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hbzlj0518

银虫 (小有名气)
引用回帖:
815791楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-05-09 18:59:15
上样Buffer                 走完继续1柱体积
洗脱buffer + 100 mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 200 mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 500 mM  NaCl    5个柱体积
洗脱buffer + 1000 mM  NaCl    5个柱 ...

受教了！
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6楼2012-08-27 11:12:33
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